[发明专利]重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的构建方法及所得株和应用有效
| 申请号： | 201710732719.8 | 申请日： | 2017-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN107723269B | 公开（公告）日： | 2021-07-09 |
| 发明（设计）人： | 赵新新;程安春;代勤龙 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;A61K39/116;A61K39/112;A61P31/04;C12R1/42 |
| 代理公司： | 成都玖和知识产权代理事务所(普通合伙) 51238 | 代理人： | 黎祖琴 |
| 地址： | 611130 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的构建方法，其包括步骤：以鼠伤寒沙门菌ATCC14028为基础菌株，通过自杀质粒pRE112介导的同源重组法，构建缺失asd、crp和rfbN基因的菌株；通过Gibson组装的方法将纽波特沙门菌ATCC 27869的O‑抗原基因簇部分基因片段wzx‑wbaR‑wbaL‑wbaQ‑wzy‑wbaW‑wbaZ与含T1T2终止子、pSC101 origin、asd基因表达盒、Amp抗性基因盒和Ptrc启动子的DNA骨架片段进行融合连接，构建Asd+质粒pCZ11‑1；将所得Asd+质粒pCZ11‑1转入上述所得菌株，即得。本发明构建得到的重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株具有高水平的针对同源LPS和异源LPS的血清IgG应答，对同源强毒株—鼠伤寒沙门菌ATCC14028和异源强毒株—纽波特沙门菌SLN06具有100％的免疫保护效率。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 伤寒 沙门 二价 疫苗 构建 方法 所得 应用 | ||
【主权项】：
一种重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)以鼠伤寒沙门菌ATCC14028为基础菌株，通过自杀质粒pRE112介导的同源重组法，构建同时缺失asd、crp和rfbN三个基因的菌株；(2)通过Gibson组装的方法将纽波特沙门菌ATCC 27869的O‑抗原基因簇部分基因片段wzx‑wbaR‑wbaL‑wbaQ‑wzy‑wbaW‑wbaZ与含T1T2终止子、pSC101origin、asd基因表达盒、Amp抗性基因盒和Ptrc启动子的DNA骨架片段进行融合连接，构建Asd+质粒pCZ11‑1；所述wzx‑wbaR‑wbaL‑wbaQ‑wzy‑wbaW‑wbaZ的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；(3)将步骤(2)所得Asd+质粒pCZ11‑1转入步骤(1)所得菌株，即得所述重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株；所述重组鼠伤寒沙门菌二价疫苗株具有高水平的针对同源LPS和异源LPS的血清IgG应答，对同源强毒株—鼠伤寒沙门菌ATCC14028和异源强毒株—纽波特沙门菌具有100％的免疫保护效率；所述纽波特沙门菌对于BALB/C小鼠的LD50为2×107CFU。
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