[发明专利]一种胞内劳森菌分离方法

摘要

一种猪胞内劳森菌的分离培养方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括以下步骤：病料的采集与处理；小鼠的肠上皮原代细胞进行贴壁培养；分离细菌培养。本发明具有以下有益效果：本发明所改变了传统的病料处理方法，省去了以往繁琐的操作步骤，提出了一种新的细菌分离液，大大缩短了细菌的分离时间；提出了应用胎鼠的肠上皮原代细胞用来培养细菌，为胞内劳森菌提供了一个模拟体内的体外培养环境，增加了分离细菌的成功率；应用微需氧产气袋进行培养，解决了价格昂贵的智能多气培养箱的问题，大大降低了细菌分离成本。

主权项

一种胞内劳森菌分离方法，其特征在于包括以下步骤：1）取患有增生性肠炎典型症状的疑似病猪的回肠，用pH为3.0‑5.0的PBS溶液进行洗1‑3次，刮取回肠黏膜1‑10g，置于匀浆器内进行匀浆，再加入2‑10 ml细菌分离液中，充分混匀，置于室温环境下5‑20min，然后按100‑500g离心5‑10min，取上清，依次通过5.0、1.2、0.45um滤器进行过滤，滤液置于‑20℃保存；2）取小鼠的肠上皮原代细胞进行贴壁培养；3）将步骤1）得到的胞内劳森菌分离物用10%FBS的HDMEM细胞培养液按1:5‑1:10稀释，加入到汇合度为30%‑50%小鼠的肠上皮原代细胞中，之后将细胞瓶置于微需氧产气袋中培养，气体有效浓度为8%‑15% O2、5%‑10%CO2，培养3‑5d，每天更换一次新的培养液。