[发明专利]胡椒碱在动物体内代谢产物的检测方法

摘要

本发明公开了一种胡椒碱在动物体内代谢产物的检测方法，其包括：(1)样品制备步骤：将含有胡椒碱代谢产物的生物样品匀浆，得到清液；将所述清液上装有反相填料的固相萃取柱，依次采用水和甲醇作为洗脱剂进行洗脱，分别得到水洗脱液和甲醇洗脱液，并收集甲醇洗脱液；将所述甲醇洗脱液挥干，残渣用溶剂溶解，离心，得到样品溶液；(2)检测步骤：将所述样品溶液采用高效液相色谱‑质谱联用法进行检测分析，得到总离子流色谱图。本发明的检测方法灵敏度高，特异性强。

主权项

一种胡椒碱在动物体内代谢产物的检测方法，其包括如下步骤：(1)样品制备步骤：将含有胡椒碱代谢产物的生物样品的清液上装有反相填料的固相萃取柱，依次采用水和甲醇作为洗脱剂进行洗脱，分别得到水洗脱液和甲醇洗脱液，并收集甲醇洗脱液；将所述甲醇洗脱液挥干，残渣用溶剂溶解，离心，得到样品溶液；(2)检测步骤：将所述样品溶液采用超高效液相色谱‑线性离子阱‑静电场轨道阱质谱法进行检测分析，检测条件包括：色谱条件：色谱柱：反相色谱柱；流动相：0.1vol％甲酸水溶液(A)‑有机溶剂(乙腈与甲醇体积比为3∶1，B)；梯度洗脱条件：0→2min，5vol％B；2→3min，5→10vol％B；3→17min，10→30vol％B；17→28min，30→60vol％B；28→30min，60→80vol％B；30→35min，80vol％B；柱温为30℃；进样体积为2μL；流速为300μL/min；质谱条件：电喷雾离子源负离子检测模式(‑ESI)，毛细管电压30V，喷雾电压3.0kV，毛细管温度350℃，鞘气30arb，辅助气10arb；采用傅里叶变换(FT)进行全扫描(FS)和母离子列表(PIL)扫描，一级分辨率为30 000，扫描范围m/z100‑1 000；二级质谱采用数据依赖扫描(DDS)，扫描分辨率为15 000，选取上一级丰度最高的至少一个离子峰进行碎片裂解，激活时间30ms，归一化碰撞能量：70％；数据采集系统为Xcalibur 2.1，得到总离子流色谱图。