[发明专利]利用花药培养快速选育广亲和水稻材料的方法

摘要

本发明属于生物领域，具体公开利用花药培养快速选育广亲和水稻材料的方法。申请人利用甬优1540进行花药培养，愈伤组织诱导率高达57.8%，绿芽分化率达到43%，获得的DH系比其他材料获得的DH系更容易克服籼粳交杂种结实率低的缺点。本发明的方法不仅可以大大缩短育种年限、提高育种效率，而且利用本发明方法获得的广亲和DH系能使典型籼稻、粳稻及不育系均正常结实。本发明获得的纯合广亲和DH系可以直接作为亲本材料，为籼粳交杂种优势利用创制了新的种质资源。

主权项

利用花药培养快速选育广亲和水稻材料的方法，包括下述步骤：1.1、花药培养再生植株的获得（1）预处理：新鲜水稻幼穗，75%酒精表面消毒后，用保鲜膜包好幼穗，4℃冰箱中预处理7‑10天；（2）诱导培养：预处理结束后，剥去多余叶片和叶鞘，留取发育适宜的带枝小穗，装入无菌烧杯中，先用75%酒精表面消毒30s，再用0.1%升汞溶液浸泡10‑12 min，并用无菌水冲洗3‑4次，每次1‑2min，最后用无菌滤纸吸干小穗水分；在超净工作台上从颖壳基部1/3处剪断花丝，将花药抖落至诱导培养基上，每个三角瓶接种80‑100个花药，25‑28℃暗培养；所述的诱导培养基为N6+2，4‑D 2.0‑3.0mg/L+KT 0.5‑1.5mg/L +NAA2.0‑3.0 mg/L +蔗糖30‑50g/L；（3）分化培养及生根：愈伤组织直径达到2mm时将其转移到分化培养基，25‑28℃、1000‑1500Lx、10‑12h/d光照培养直至分化成绿苗；当绿苗长到5cm时，在超净工作台上将绿苗转移到生根培养基上进行生根；所述的分化培养基为：MS+KT 2.0‑3.0 mg/L +6‑BA2.0‑3.0mg/L +NAA 0.2‑0.8 mg/L +IAA0.2‑0.8mg/L +蔗糖30 g/L；所述的生根培养基为：1/2MS+NAA0.5‑1.0 mg/L+活性炭0.8‑1.0 g/L+蔗糖20 g/L；1.2、纯合DH系的获得将根系发育良好的再生植株经过炼苗后大田移植，每个愈伤组织来源的植株单株收种，每个单株获得的种子次年种成株系，通过田间农艺性状调查，选取田间农艺性状纯合株系10‑30个；结合室内考种，选取农艺性状优良结实率高丰产性好的DH系5‑15个；1.3、广亲和水稻材料的获得针对广亲和基因S5n设计引物，对选取的DH系进行PCR检测，筛选具备该基因的植株，即得。