[发明专利]一种化合物balanol的生物合成方法及基因簇

摘要

本发明公开了一种化合物balanol的生物合成方法及基因簇，该生物合成方法高效，方便，包括：将blnR基因片段连入载体中，得到表达质粒；将表达质粒利用电转化转入根癌农杆菌EHA105，筛选培养，得到带有表达质粒的农杆菌；接种于液体培养基避光振荡培养，取培养液，然后再避光振荡培养，得到重组农杆菌EHA105菌液；收集大团囊虫草分生孢子，得到大团囊虫草菌分生孢子悬浮液；取重组农杆菌EHA105菌液和大团囊虫草菌分生孢子悬浮液混合，避光共培养，得到共培养混合菌体；得到OE::blnR大团囊虫草转化子，发酵培养，发酵液经分离得到化合物balanol。

主权项

一种化合物balanol的生物合成方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将blnR基因片段连入载体中，得到表达质粒；2)将表达质粒利用电转化转入根癌农杆菌EHA105，经链霉素和卡那霉素抗性筛选培养，挑菌落PCR鉴定，得到带有表达质粒的农杆菌；3)将带有表达质粒的农杆菌单克隆接种于液体培养基避光振荡培养，取培养液，重悬菌体至OD6000.1‑0.15，然后再避光振荡培养，使OD600达到0.5‑0.6，得到重组农杆菌EHA105菌液；4)培养大团囊虫草，收集大团囊虫草分生孢子，经血球计数板计数调整孢子浓度至(0.5～5)*106个/ml，得到大团囊虫草菌分生孢子悬浮液；5)取重组农杆菌EHA105菌液和大团囊虫草菌分生孢子悬浮液混合，避光共培养，得到共培养混合菌体；6)用无菌水洗涤共培养混合菌体，之后涂布于平板上，倒置培养至转化子出现，将转化子转接到选择性平板上进行继代培养3‑5次，经PCR鉴定，得到OE::blnR大团囊虫草转化子；7)将鉴定正确的OE::blnR大团囊虫草转化子发酵培养，发酵液经分离得到化合物balanol。