[发明专利]一种肠道内容物宏基因组DNA提取的前处理方法有效
| 申请号： | 201710830797.1 | 申请日： | 2017-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN107475250B | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 张杰豪;束文圣;周集中;叶脉;徐卓菲;刘玉莲 | 申请（专利权）人： | 广东美格基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518000 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种肠道内容物宏基因组DNA提取的前处理方法。本发明前处理方法是在肠道内容物样品中加入去腐剂清洗2遍，再加入去核酸酶溶液清洗，通过冻融法、裂解法对细胞进行裂解，充分释放其中的DNA，最后加入蛋白酶K、SDS和RNA酶去除细胞里面的蛋白质、纤维和RNA，所得产物经常规方法即可得到肠道内容物宏基因组DNA。本发明前处理方法对于杂食性动物的肠道内容物宏基因组DNA的提取有明显的效果，提取的纯度及提取量都能满足PCR扩增、高通量测序等下游实验，具有很强的实用性。 | ||
| 搜索关键词： | 肠道内容物 宏基因组 前处理 清洗 高通量测序 核酸酶溶液 杂食性动物 细胞 蛋白酶K 提取量 冻融 腐剂 裂解 去除 蛋白质 纤维 释放 | ||
【主权项】：
1.一种肠道内容物宏基因组DNA提取的前处理方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)在肠道内容物样品中加入去腐剂清洗2遍、离心去上清；(2)加入去腐剂和1mM的EDTA溶液清洗；(3)通过冻融法并加入10mg/ml的溶菌酶对细胞进行裂解；(4)在65℃下加入蛋白酶K、摩尔质量为10％的SDS去除蛋白质和纤维；(5)加入终浓度为20mg/ml的RNA酶去除RNA；其中，所述去腐剂包括0.5M的EDTA、1M的Tris‑HCl、0.1M的NaH2PO4、0.1M的Na2HPO4和1.5M的NaCl；步骤(1)中，所述肠道内容物样品为鱼类的前肠道内容物、中肠道内容物和/或后肠道内容物。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广东美格基因科技有限公司，未经广东美格基因科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710830797.1/，转载请声明来源钻瓜专利网。
