[发明专利]一种检测普氏立克次体的RPA方法、其专用引物和探针及用途有效
申请号: | 201710850532.8 | 申请日: | 2017-09-20 |
公开(公告)号: | CN107723376B | 公开(公告)日: | 2020-10-20 |
发明(设计)人: | 李越希;齐永;邵银秀;尹琼;王长军;李素芹;陈红霞;饶继先;李佳萌;胡志斌;陈乐如;郭峻;杨彬彬 | 申请(专利权)人: | 李佳萌 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11 |
代理公司: | 南京品智知识产权代理事务所(普通合伙) 32310 | 代理人: | 奚晓宁;杨陈庆 |
地址: | 210002 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明提供了用于检测普氏立克次体的RPA检测方法,其专用引物、探针及其在普氏立克次体检测中的用途。所述检测方法、其专用引物和探针及基于普氏立克次体特异性保守序列设计的,具有SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的寡核苷酸序列。本发明首次将新型恒温扩增技术RPA应用于普氏立克次体的检测中,该方法模拟体内DNA复制的酶反应过程,依赖特定的酶和蛋白组合,包括重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶,对DNA模板进行扩增,可在37℃的恒温下实现特定核酸序列的扩增,扩增产物可通过侧向层析核酸试检测纸条实现可视化判别。本发明建立的检测方法灵敏度可达10拷贝数/μL,特异性高,对硬件设备的要求很低,且可在30min内完成检测,无需对样品进行复杂处理、适合现场检测,适于推广应用。 | ||
搜索关键词: | 一种 检测 立克次体 rpa 方法 专用 引物 探针 用途 | ||
【主权项】:
一种用于检测普氏立克次体的RPA专用引物,是根据普氏立克次体特异性保守序列设计的,所述普氏立克次体特异性保守序列具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列SEQ ID NO.1:AAACAGGAAATTAATTCTATTAATAGTTTAGATTCAGCAGTTCTTGTAGAATCACAACAGTTTAAAAAAACTAAAAGTCTAGAAGATATAGAAGATGGATCTTTATCATCACAATTAAAGCAAACTAAATATAAATCGGTGTTATCACCTTCTTCTTATGTTAACGACATGTTTAGTAATGAGCATCATCAAAACTCTAGCATTGAACTACCAAAGTTGTTGCATAGTTCATTGAGTGATACGAACAGTTCGCTTAATGATTGTATAAATCAACTACGATGTGCAAATACATCAGATGTATATAATTTATCATATACACTTTCAAATAAAACAAAGCAATTAAGTATTGATGAACTCAAAAATACATTAGAACAAATGCAAACTTCTCCTAATATAAATATAGTATTGCCTATGCTAATTAGAGTACAACAAGATTATGTAAATGAGGTTGCTGAAATATACCAGCAGACTATAGAACAAAGAAAGCAAAACCCAAGTGAGCAGGCAAAAAATCAAGAAGAGGTAGTAGCAGCTTACTTTACTCAAGAATACGATAAACTA 。
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