[发明专利]鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法及应用

摘要

本发明属于色谱分析技术领域，具体公开了鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取器的制备；(2)在线提取；(3)高效液相色谱串联质谱检测；(4)特征图谱的构建。本发明所提供的在线提取‑高效液相色谱体系装置简单，操作简便，需要的样品量少，耗时少，极大地促进了该方法在实际生产中的应用，具有很好的应用前景。

主权项

一种鲜冬虫夏草在线提取高效液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取器的制备：混合对照品提取器的制备：分别取对照品适量，精密称定，加入溶剂溶解，制成混合对照品溶液；精密量取混合对照品溶液，加入到已填充了硅藻土的预柱芯中，干燥，柱芯两端用微孔滤膜覆盖，安装于匹配的预柱套中，得到混合对照品的提取器；供试品提取器的制备：取供试品适量，加入硅藻土充分研磨；精密称取混合均匀后的供试品和硅藻土，填充于空预柱芯，两端用微孔滤膜覆盖，安装于匹配的预柱套中，得到供试品的提取器；(2)在线提取：将提取器接入高效液相色谱仪中的保护柱前，且置于柱温箱中；提取溶剂通过液相高压泵输送，在提取器中进行在线提取得到提取液；提取过程由自动进样器吸取水触发；其中所述柱温箱具有第一控温模块和第二控温模块；第一控温模块控制提取器的温度，第二控温模块控制保护柱和色谱柱的温度；(3)高效液相色谱串联质谱检测：步骤(2)所得提取液进入保护柱，再经色谱柱进行高效液相色谱串联质谱检测；高效液相色谱色谱条件为：流速为1～2.5mL/min；流动相A为水，流动相B为0.1％乙酸‑甲醇溶液；梯度洗脱为：0～3.5min：0％B；3.5～15.5min：0％B→30％B；15.5～25min：30％B；(4)特征图谱的构建：根据混合对照品提取器在线检测结果，确定供试品提取器在线检测结果中色谱峰，将以下8个色谱峰建成特征图谱：峰1为尿嘧啶，保留时间为2.76min，质谱数据为113[M+H]+m/z；峰2为尿苷，保留时间为3.84min，质谱数据为245[M+H]+m/z；峰3为肌苷，保留时间为8.66min，质谱数据为269[M+H]+m/z；峰4为鸟嘌呤，保留时间为9.24min，质谱数据为152[M+H]+m/z；峰5为鸟苷，保留时间为9.75min，质谱数据为284[M+H]+m/z；峰6为腺嘌呤，保留时间为13.51min，质谱数据为136[M+H]+m/z；峰7为腺苷，保留时间为15.30min，质谱数据为268[M+H]+m/z；峰8为2’‑脱氧腺苷，保留时间为17.55min，质谱数据为252[M+H]+m/z。