[发明专利]一种基于荧光定量PCR技术检测鸽新城疫病毒的方法在审
| 申请号： | 201710861515.4 | 申请日： | 2017-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN108486279A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 刘存霞;党安坤;孙圣福;胡峰;于可响;张月;兰邹然 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院家禽研究所;山东省动物疫病预防与控制中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京国坤专利代理事务所(普通合伙) 11491 | 代理人： | 赵红霞 |
| 地址： | 250023 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术技术领域，具体涉及一种基于荧光定量PCR技术检测鸽新城疫病毒的方法。本发明所述基于荧光定量PCR技术检测鸽新城疫病毒的方法，利用荧光定量PCR技术对鸽NDV VI型进行特异性检测，而鸡新城疫强毒株和经典的LaSota疫苗毒株检测结果为阴性，为鸽NDV的临床检测提供了一种快速、准确、高通量的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光定量PCR 新城疫病毒 技术检测 特异性检测 鸡新城疫 检测结果 临床检测 疫苗毒株 高通量 强毒株 阴性 生物技术 | ||
【主权项】：
1.一种基于荧光定量PCR技术检测鸽新城疫病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)鸽新城疫病毒总RNA提取与反转录：根据鸽新城疫病毒株，设计用于进行荧光定量扩增的引物和荧光探针，并利用现有技术提取病毒总RNA，并进行反转录；(2)质粒构建：设计引物以反转录cDNA为模板扩增NDV F基因，并将所得PCR扩增产物与pMD18‑T载体连接，并转化至DH5α感受态细胞中，PCR鉴定阳性质粒并送样测序，得到pMD18T‑F质粒；(3)荧光定量PCR检测：以构建的pMD18T‑F质粒为模板，采用一步法RT‑PCR反应体系，以不同浓度的质粒为阳性标准品，绘制标准曲线；(4)样品检测：选取待检测样品，加PBS缓冲液处理并取上清，按照步骤(1)‑(3)提取RNA并进行实时荧光RT‑PCR检测，并结合标准曲线测定待测样品。
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