[发明专利]一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法在审
| 申请号： | 201710904697.9 | 申请日： | 2017-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN109593837A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 姜毓君;满朝新;王蕊;潘瑞丽;孙露宏 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，属于食品安全技术领域。该方法是将待检物质中的菌体细胞进行破碎处理释放出DNA，萃取除杂后获得粗提DNA溶液，向粗提DNA溶液中加入氨基磁珠，孵育捕获DNA；建立阪崎克罗诺杆菌特异性PCR反应，以捕获的DNA为模板进行PCR扩增；设计阪崎克罗诺杆菌的DNA探针，将胶体金与DNA探针进行孵育，然后进行老化获得胶体金探针，将PCR产物与胶体金探针混合杂交，加入MgSO4溶液观察颜色变化。本发明方法步骤简单，特异性好，用时较短，可以实现快速检测，无需抗体等昂贵试剂，成本低。本发明适用于快速检测食品中的阪崎克罗诺杆菌。 | ||
| 搜索关键词： | 杆菌 捕获 快速检测 胶体金探针 比色法 纳米金 粗提 孵育 氨基 快速检测食品 特异性PCR 昂贵试剂 待检物质 混合杂交 菌体细胞 破碎处理 食品安全 颜色变化 胶体金 除杂 磁珠 抗体 用时 萃取 老化 释放 观察 | ||
【主权项】：
1.一种基于磁捕获的纳米金比色法快速检测阪崎克罗诺杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将待检物质中所含菌的菌体细胞进行破碎处理释放出DNA，萃取除杂后获得粗提DNA溶液，2)向步骤1)的粗提DNA溶液中加入活化好的氨基磁珠，孵育捕获粗提DNA溶液中的DNA；3)建立阪崎克罗诺杆菌的特异性PCR扩增反应，以步骤2)捕获到的DNA为模板进行PCR扩增，获得PCR产物；4)设计阪崎克罗诺杆菌的DNA探针，将胶体金与DNA探针进行孵育，然后加入磷酸缓冲液进行老化，获得胶体金探针；5)将步骤3)获得的PCR产物与步骤4)获得胶体金探针进行混合杂交，然后加入MgSO4溶液后5min内观察颜色变化，若溶液仍呈现红色表明该待检测物质中含有阪崎克罗诺杆菌，若溶液由红色变成蓝紫色表明该待检测物质中不含有阪崎克罗诺杆菌。
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