[发明专利]一种制备高纯河豚毒素的方法

摘要

本发明涉及一种以河豚鱼内脏为原料规模化提取生产高纯河豚毒素的方法，其产品可用于戒毒、镇痛及降压药物制剂。解决了目前提取、提纯河豚毒素的方法繁多，但这些方法多多少少都存在着一定的缺陷，如产出纯度高的高效液相法也存在这设备昂贵（高压液相仪）的问题，又例如浸渍分馏法，存在着效率低下、产品纯度不高等问题，提供了一种能够大规模提取制备河豚毒素的方法，该方法工艺简单、高效，产率高，品质优良，产品纯度高于99.5%，直接符合生物学研究和临床应用的要求。本发明的另一目的是提供了含有本法制备的河豚毒素产品的各种制剂。

主权项

一种制备高纯河豚毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）将河豚内脏捣碎、匀浆，倒入pH值为3.5‑4.5的醋酸水溶液加热煮沸，冷却后加入与醋酸水溶液等体积的甲醇‑水溶液，经200‑300r/m转速搅拌后用筛绢过滤收集滤液，滤渣重复上述操作3‑5次，将滤液合并后以板框压滤机压滤得到橙黄色毒液；2）橙黄色毒液浓缩脱脂后，在低温条件下以活性炭脱色纯化，滤出活性炭，再加入大孔吸附剂同时以90‑120r/m转速搅拌进一步吸附纯化，反应30‑35min，布氏漏斗抽滤得到浅黄色毒液；3）将浅黄色毒液通过阳离子交换树脂柱，至树脂吸附至饱和状态后以去离子水洗阳离子交换树脂柱，再以醋酸‑醇‑水体系溶液洗脱，收集洗脱液；4）对洗脱液进行冷冻干燥和减压浓缩，至洗脱液体积减少至原体积的1/3‑1/4得到浓缩河豚毒素毒液，以纳滤膜对浓缩河豚毒素毒液进行纳滤收集滤液，再对滤液重复进行三次纳滤处理，得到无杂质河豚毒素毒液；5）将无杂质河豚毒素毒液通过交联葡聚糖凝胶柱，以去离子水洗交联葡聚糖凝胶柱，再用pH值为3‑4的醋酸水溶液洗脱，收集洗脱液得到液态河豚毒素粗品；6）向液态河豚毒素粗品中滴加氨水调节pH至9‑10，优选调节pH至9.2‑9.5，在低温减压环境下静置20‑24h，得到河豚毒素粗品；7）将河豚毒素粗品溶于以醋酸‑醇体系溶液溶解，再滴加氨水调节pH至9‑10，优选调节pH至9.2‑9.5，在低温减压环境下静置20‑24h，得到所需河豚毒素。