[发明专利]一种金线草组织培养及快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，以金线草种子为外植体，通过筛选和优化初代诱导、继代增殖、生根和移栽培养基配方和培养条件，经过无菌苗获取、不定芽的初代诱导、继代增殖和生根培养以及试管苗的移栽阶段，通过采用特定的改良MS培养基实现药用植物金线草种苗的快速繁殖，一般只需80‑85天就可以获得金线草的幼苗，并且金线草幼苗的成活率可达90％以上，从而为该物种的遗传改良、种质资源保护和开发利用奠定基础。

主权项

1.一种金线草组织培养及快速繁殖的方法，以金线草种子为外植体，其特征在于依次经a无菌苗的获取、b不定芽的初代诱导、c芽的继代增殖、d生根培养以及e试管苗的移栽；所述a无菌苗的获取是将消毒后的金钱草种子接种到培养基上，所用的诱导培养基为：每升含有硫酸链霉素20‑50mg，蔗糖30g、琼脂7.5g，其余为MS培养基，pH为5.8‑6.0，种子萌发率为60%‑70%；所述b不定芽的初代诱导是将3‑5cm的无菌苗去掉叶片，剪成1‑2cm，接种到诱导培养基上，在温度25±1℃、光照强度40μmol·m^‑2·s^‑1、光照时间12h·d^‑1的条件下，培养20d，茎段外植体诱导形成新的不定芽，所用的诱导培养基为：每升1号改良MS培养基含有BAP3.0 ‑6.0μmol、TDZ0.1‑0.5 μmol、NAA0.1‑0.3 μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g，pH为5.8‑6.0，诱导系数为12.5‑17.6；所述c芽的继代增殖是将不定芽丛切开，3‑4个芽为一丛，转入继代的培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^‑2·s^‑1、光照时间12h·d^‑1的条件下，培养20d，丛生芽生长健壮成芽苗，增殖系数为8.7‑11.4，所用的继代的培养基为：每升1号改良MS培养基含有BAP1‑3μmol、NAA0.1‑0.3 μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g，pH为5.8‑6.0；所述d生根培养是将高3‑4cm的芽苗分切转入生根培养基上，在温度25±1℃、光照强度50μmol·m^‑2·s^‑1、光照时间12h·d^‑1的条件下，培养20d后，生根的试管苗形成，所述的生根培养基为：每升2号改良MS培养基或MS培养基含有IBA1.0 ‑ 3.0 μmol、NAA2.0‑5.0 μmol、蔗糖30g、琼脂7.5g，pH为5.8‑6；所述e试管苗移栽是将长好根的试管苗移栽到移栽基质中，放置于遮荫温室中培养，每隔5d浇一次Hoagland's营养液，培养10d，再将遮阴布移除，让金线草小苗得到充足光照，再培养15天，得到生长健壮的金线草幼苗；所述b不定芽的初代诱导和c芽的继代增殖中用到的1号改良MS培养基是把国际通用的MS培养基大量元素中的NH₄NO₃成分减少到原来重量的1/2，KNO₃成分减少到原来重量的3/4，KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O不变，其余微量元素、铁盐、有机成分不变；所述d生根培养用到的2号改良MS培养基是把国际通用的MS培养基大量元素中的KNO₃、NH₄NO₃、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O成分减少到原来重量的1/2，CaCl₂·2H₂O不变，其余微量元素、铁盐、有机成分不变。