[发明专利]一种恩拉霉素高产菌株选育方法

摘要

本发明涉及一种恩拉霉素高产菌株筛选方法，具体步骤如下确定恩拉霉素生物合成过程中的限速酶编码基因短板基因；构建硫链丝菌素抗性基因整合型载体；对改造后的菌株进行诱变处理，并从中筛选硫链丝菌素高抗性菌株；对筛选到的高抗菌株进行遗传操作，并将tsr开放阅读框恢复为原来的endX基因；所得菌株既为恩拉霉素高产突变菌株。本方法结合了传统的诱变育种技术以及现代分子生物学方法的优势，实现了恩拉霉素高产菌株的快速高效筛选，该方法也适用于其它抗生素高产菌株的筛选。

主权项

一种恩拉霉素高产菌株选育方法，其特征在于：步骤如下：一、确定产恩拉霉素菌株的短板基因；二、构建硫链丝菌素抗性基因整合型载体；三、将步骤二的整合型载体接合转移到链霉菌；四、筛选步骤三中具有硫链丝菌素抗性基因标记成功的菌株SKD；五、检测菌株SKD对硫链丝菌素最低抑菌量；六、对标记成功的菌株SKD进行紫外诱变获得诱变菌株；七、筛选诱变菌株中经过诱变后提高硫链丝菌素抗性的菌株；八、将步骤七中抗性高的菌株中的tsr标记基因的敲除，将步骤一种的短板基因endX插入到敲除位置，进行菌株的回复突变，获得回复突变菌株；九、将步骤八中回复突变成功的菌株进行测活，获得恩拉霉素高产菌株。