[发明专利]一种汉中防已组织培养方法

摘要

本发明公开了一种汉中防已组织培养方法，汉中防已为马兜铃科植物，四季均可采收，但以秋季采挖者为好。挖取根后去净泥沙及须根，晒至半干，直径在2.5cm以上对半劈开，晒干即可。药材性状根呈圆柱形，外皮浅棕色或淡棕黄色，刮去外皮为浅灰黄色。质坚实，不易断，断面不平坦，刺状，横切面灰白色至黄白色，粉性，皮部较厚。汉中防已味苦，微涩。主要成份含马兜铃酸，ϐ‑谷甾醇，木兰花碱，尿囊素等。功用主治祛风利水，除湿镇痛。用于头面四肢水肿，腰膝关节疼痛功用。本发明以汉中防已带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现汉中防已的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。

主权项

一种汉中防已组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：（1）芽诱导培养：以汉中防已带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成4厘米长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡10min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用76%乙醇消毒32s后用无菌水洗4次，再用0.15%升汞溶液消毒28min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3100lx条件下培养35天，统计其芽诱导率及生长情况；（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2600lx，置于培养温度为25℃的条件下培养27天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为7cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3600lx，培养温度为25℃的条件下培养38天后统计生根情况；（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝1:3混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽。