[发明专利]一种厌氧氨氧化菌的真空冷冻干燥保藏及复壮的方法

摘要

一种厌氧氨氧化菌的真空冷冻干燥保藏及复壮的方法，属于含氮废水生物处理技术领域。将待保藏的厌氧氨氧化菌混培物取出，加入磷酸盐缓冲溶液、混匀，离心去除上清液，得到厌氧氨氧化菌沉淀物；将沉淀物与二甲基亚砜混合，得到的混合物置于‑20℃中预冻；将冷冻混合物置于真空冷冻干燥机中，在温度‑92℃、真空度5Pa下冷冻干燥以得到厌氧氨氧化菌干粉菌剂；将得到的干粉菌剂真空密封，置于4℃下避光长期保藏。复壮前干菌粉需要在4℃厌氧氨氧化菌培养液中进行24h的细胞补水过程；菌体自溶期结束后，向反应器中投加反应器体积1％的厌氧氨氧化混培物以加快复壮过程，复壮后的厌氧氨氧化菌的活性恢复率较高且具有较高的脱氮能力。

主权项

一种厌氧氨氧化菌的真空冷冻干燥保藏方法，其特征在于，步骤如下：(1)对待保藏的厌氧氨氧化混培物，在6000rpm条件下离心10min后，弃置上清液；再加入0.2M磷酸盐缓冲溶液、混匀，离心去除上清液，重复多次，得到厌氧氨氧化菌沉淀物；(2)将步骤(1)得到的厌氧氨氧化菌沉淀物置于经灭菌处理后的培养皿中，再向培养皿中加入二甲基亚砜，混匀，混合过程进行氮气吹扫；其中，二甲基亚砜的添加量为混合物总质量的3％；(3)将步骤(2)得到的混合物置于‑20℃条件下预冻；(4)将上述装有待保藏菌体的表面皿置于真空冷冻干燥机中，在温度‑92℃、真空度5Pa条件下，冷冻干燥，得到干菌粉；(5)将步骤(4)获得的干菌粉转移真空袋后，经真空密封后放入4℃避光保藏。