[发明专利]一种纤维素酶的制备方法

摘要

一种纤维素酶的制备方法，包括选用里氏木霉制备所述的低温中性纤维素酶，添加了种子液的扩大生产，a.培养至发酵液OD600到达0.8‑1.0；b.流加培养，优选的，流加培养时发酵液的OD600为0.8‑1.0；或取出部分发酵种子液，以获得枯草芽孢杆菌B3发酵种子液，向保留的种子液中补加无菌发酵培养基，并继续发酵培养至发酵液OD600到达0.8‑1.0，c.枯草芽孢杆菌B3发酵种子液。提高生产效率和设备利用率；减少设备投入及能耗、降低生产成本；提高了发酵种子液中成活性。

主权项

一种纤维素酶的制备方法，包括选用里氏木霉制备所述的低温中性纤维素酶，所述制备方法包括以下步骤：(1)将里氏木霉菌株接种到斜面活化培养基上，活化菌种；培养活化后的菌种，挑取单菌落制备孢子悬浮液，并用紫外照射孢子悬浮液，诱变得到孢子菌落；(2)将(1)中的孢子菌落涂布于初筛培养基中，在10～15℃下培养3～5天，挑选初筛菌株并纯化该菌株；(3)在10～15℃下，将(2)中的纯化菌株按5％的接种量接种于发酵培养基中，逐级扩大培养制备种子液，培养时间为48～72小时；(4)将(3)中的种子液按发酵液体积3～5％的接种量接种于产酶培养基中，10～15℃培养96～144小时，即里氏木霉发酵生产低温中性纤维素酶结束；将发酵液在4000～6000rpm离心，收集所得液体为粗酶液；(5)将(4)得到的粗酶液进行超浓缩过滤，得到1000～2000UI/G的浓缩酶液；其特征在于：步骤(4)中的扩大种子液的制备步骤为：a.培养至发酵液OD600到达0.8‑1.0；b.流加培养，优选的，流加培养时发酵液的OD600为0.8‑1.0；或取出部分发酵种子液，以获得枯草芽孢杆菌B3发酵种子液，向保留的种子液中补加无菌发酵培养基，并继续发酵培养至发酵液OD600到达0.8‑1.0，c.枯草芽孢杆菌B3发酵种子液。