[发明专利]一种提取板蓝根干样基因组DNA的方法

摘要

一种提取板蓝根干样基因组DNA的方法，包括板蓝根干样组织去皮在液氮中研磨成粉末；加入CTAB溶液后混匀，65℃水浴2~3 h；沉淀DNA时，异丙醇在4℃下预冷。采用本发明方法，试剂易得，成功率高且所得DNA质量较好，有利于PCR反应及分子鉴定等后续的工作。

主权项

一种提取板蓝根干样基因组DNA的方法，其特征是按如下步骤：（1）取去除表皮的板蓝根干样组织0.05~0.1 g，使用液氮在研钵中研磨成粉末，在组织解冻前转移到1.5mL离心管中；（2）加入500~750 μL的 2%的CTAB溶液，颠倒混匀后在65℃水浴2~3 h，期间要上下颠倒混匀数次；（3）取出离心管，加入与步骤（2）等体积的按24:1体积比混合的三氯甲烷与异戊醇的混合液，上下颠倒充分混合，晃动数次；（4）4℃条件下14000 rpm 离心15min；（5）用移液枪吸取管中上层水相；（6）在抽提出的水相中加入与等体积4℃下预冷的异丙醇，轻轻晃动混匀后在‑20 ℃沉淀6~12小时；（7）4℃条件下14000 rpm 离心15min，去上清，倒置于吸水纸上控干；（8）加入与步骤（2）等体积的无水乙醇，上下颠倒数次，洗涤沉淀，4℃条件下12000 rpm离心10min离心，去上清，倒置于吸水纸上控干；（9）重复步骤（8）两遍；（10）将步骤（9）所得沉淀置于超净工作台中吹干；（11）在离心管中加入30~50 μL的灭菌去离子水或者TE缓冲液(Tris‑EDTA buffer solution)，4℃放置4~6小时；（12）‑20℃或‑80℃低温保存。