[发明专利]一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法及试剂盒

摘要

本发明提供一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测试剂盒及方法，首先，通过一种适用于唾液、口腔拭子等样本类型的提取方法，10分钟得到模板DNA，其次，基于多重反应体系和独特的引物设计，分别用同一份待测样本对多个叶酸代谢多态性位点进行实时荧光定量PCR检测；野生型模板在突变型ARMS引物多重反应体系中，无扩增曲线；纯合突变型模板在野生型ARMS引物多重反应体系中，无扩增曲线；杂合型突变模板在野生型ARMS引物多重反应体系和突变型ARMS引物多重反应体系中，同时有扩增曲线，以此来判定多态性位点。本发明的方法操作简单，结果判定容易，从模板的制备到实验结果分析，只需1小时，准确性高，特异性好。

主权项

一种叶酸代谢基因多态性位点的基因型检测方法，其特征在于：其包括以下步骤：（1）：DNA提取；（2）：在相同的反应体系中，使用叶酸代谢基因多态性位点的基因野生型模板的特异性ARMS引物和突变型模板的特异性ARMS引物分别对同一份待测样本进行实时荧光定量PCR检测；所述野生型模板的特异性ARMS引物的3`末端终止在待测位点处并且与野生型序列匹配，其中，在所述引物的3`末端第2‑5位设置一个或多个错配碱基；所述突变型模板的特异性ARMS引物的3`末端终止在待测位点处并且与突变型序列匹配，其中，在所述引物的3`末端第2‑5位设置一个或多个错配碱基；所述野生型模板的特异性ARMS引物和所述突变型模板的特异性ARMS引物共用上游或下游引物，所述共用上游或下游引物分别与所述野生型模板的特异性ARMS引物或所述突变型模板的特异性ARMS引物一起扩增一段包含待测基因突变位点的序列；（3）：根据样本用野生型模板的特异性ARMS引物进行荧光定量PCR检测的Ct野生型和突变型模板的特异性ARMS引物进行ARMS荧光定量PCR检测的Ct突变型，来判断多态性位点的型别从而确定叶酸代谢基因突变的基因型。