[发明专利]一种利用核酸适配体和磁性材料检测凝血酶的荧光检测方法

摘要

本发明涉及一种利用核酸适配体和磁性材料检测凝血酶(thrombin)的荧光检测方法，提供了一种基于核酸适配体和PEI‑Fe3O4检测凝血酶浓度的新型生物传感器，其中寡核苷酸带负电荷，PEI‑Fe3O4富含氨基而带正电，在缓冲液中，荧光标记的核酸适配体与PEI‑Fe3O4因静电引力而吸附到Fe3O4的表面而使荧光猝灭。在核酸适配体/PEI‑Fe3O4复合物体系中加入凝血酶，凝血酶与适配体结合从而使其远离PEI‑Fe3O4的表面，荧光得以恢复。所以，通过荧光值的变化，可以检测出凝血酶的浓度，本发现只需要改变核酸适配体的序列，就可以实现对其他底物分子的检测，在凝血酶检测领域具有重大的研究和应用意义。

主权项

一种利用核酸适配体和磁性材料检测凝血酶的荧光检测方法，其特征在于：包括如下方法步骤：(1)PEI‑Fe3O4的制备：所述PEI‑Fe3O4由共沉淀方法制得；(2)以荧光标记的寡核苷酸与PEI‑Fe3O4形成的复合物作为生物检测器，具体操作步骤如下：步骤1：选择三种不同荧光FAM、TAMRA、HEX标记的三条随机寡核苷酸链和6‑FAM，分别为Random 1、Random 2、Random 3和Free FAM dye，其中，Free FAM dye为没有连接DNA的FAM荧光基团，分别将以上三条随机链和同浓度的6‑FAM加入到缓冲液中，进行荧光检测并记录；步骤2：将PEI‑Fe3O4加入到步骤1溶液中，PEI‑Fe3O4作为固相载体因静电作用吸附自由卷曲状态的寡核苷酸链；步骤3：选择FAM标记的凝血酶适配体，在凝血酶适配体/PEI‑Fe3O4复合物中加入凝血酶待测物进行反应；步骤4：在含有50nM凝血酶适配体/PEI‑Fe3O4的复合物中加入凝血酶，并检测加入前后荧光值的变化，再加入300nM的凝血酶检测荧光值变化；(3)核酸适配体/PEI‑Fe3O4复合物对thrombin的选择性试验及对凝血酶(thrombin)和溶菌酶(lysozyme)的双通道检测试验，其中所用thrombin和lysozyme的浓度均为100nM。