[发明专利]一种PCV2 Cap标记蛋白的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建方法在审
| 申请号： | 201711093013.8 | 申请日： | 2017-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN108179155A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 徐国;曾智勇;梁海英;代振江 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/66;C12N15/34 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 吴无惧 |
| 地址： | 550025 贵州*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪圆环病毒二型Cap标记蛋白的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)将PCV2GZ‑RH1株全基因克隆至pMD19‑T载体，设计引物以重组T载体为模板通过PCR技术将V5Tag或Flag Tag标签引入至PCV2的ORF2末端；(2)将携带标签的ORF2亚克隆至pFastBacHTA、pFastBacDual供体质粒，将亚克隆所得的阳性质粒转化入DH10Bac感受态细胞进行Bacmind杆粒的制备；(3)将Bacmind杆粒转染昆虫细胞，获得重组昆虫杆状病毒，重组昆虫杆状病毒扩增至P3代病毒。 | ||
| 搜索关键词： | 重组昆虫杆状病毒 表达载体 亚克隆 杆粒 构建 蛋白 转染昆虫细胞 感受态细胞 供体质粒 设计引物 阳性质粒 圆环病毒 全基因 制备 种猪 标签 克隆 病毒 携带 引入 转化 | ||
【主权项】：
1.一种猪圆环病毒二型Cap标记蛋白的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)将PCV2GZ‑RH1株全基因克隆至pMD19‑T载体，设计引物以重组T载体为模板通过PCR技术将V5Tag或FlagTag标签引入至PCV2的ORF2末端；(2)将携带标签的ORF2亚克隆至pFastBacHTA、pFastBacDual供体质粒，将亚克隆所得的阳性质粒转化入DH10Bac感受态细胞进行Bacmind杆粒的制备；(3)将Bacmind杆粒转染昆虫细胞，获得重组昆虫杆状病毒，重组昆虫杆状病毒扩增至P3代病毒。
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