[发明专利]一种快速检测β‑内酰胺类抗生素残留的方法

摘要

一种快速检测β‑内酰胺类抗生素残留的方法，属于检验技术领域。本发明以氨苄青霉素为母体与载体蛋白质直接偶联后修饰多模光纤探头实现对液体样品β‑内酰胺类抗生素的检测，通过被配置为基于从检测单元输出的电信号确定生物材料的浓度的信号处理器检测和识别待测样品溶液中是否存在目标物以及浓度信息，由此实现对目标物的检测。该检测方法较传统仪器分析方法更为简单快捷，且检测成本较低，其中，非标记方法检测的灵敏性在50 ng/ml左右，金标记检测方法的灵敏性可以达到1.56 ng/ml左右。

主权项

一种快速检测β‑内酰胺类抗生素残留的方法，其特征在于：包括下列步骤：第一步：制备氨苄青霉素‑BSA将氨苄青霉素钠盐溶于二甲基甲酰胺，搅拌至全部溶解后得A液；将牛血清白蛋白溶于pH值为7.4的PBS缓冲液中，搅拌至完全溶解后得B液；在搅拌条件下，将A液加入到 B 液中，然后向其中逐滴、均匀加入体积分数为25%的戊二醛水溶液，搅拌条件下，避光反应，所得产物用0.05M的 pH值为7.4的PBS缓冲液透析，获得包被原，即氨苄青霉素‑BSA偶联物；第二步：光纤传感器抗原包被修饰将APS光纤传感器末端没入包被原溶液中，室温静置5 min；再将APS光纤生物传感器末端没入质量分数为15%的蔗糖水溶液中，室温静置1 min，然后室温晾干后置于2～8℃干燥条件下保存，备用；第三步：非标记检测将氨苄青霉素‑BSA偶联物用pH值为7.4的PB缓冲液稀释20倍，取200 μL于微孔板的第2列中；将β‑内酰胺类抗生素受体用巴氏杀菌奶稀释60倍，然后用该液体稀释氨苄青霉素标准品到100、50、25、12.5、6.25、3.12和1.56 ng/mL，分别取200 μL于微孔板的第4列中；往微孔板的第1列中加入200 μL水，往第3列加入200 μL巴氏杀菌奶；用APS光纤传感器探头进行检测：第一列60 s，第2列60 s；第3列60 s；第4列300 s；第四步：金标记检测向1mL胶体金中加入1μL 2mg/mL的β‑内酰胺类抗生素受体，涡旋混匀，室温静置15min，加入100μL的质量分数为10%的牛血清白蛋白溶液，室温封闭15min，10000 rpm离心10 min，弃掉上层清液，加入90μL pH 值为7.4的PBS缓冲液，重悬颗粒，得到金标β‑内酰胺类抗生素受体；将氨苄青霉素‑BSA偶联物用pH值为7.4的PB缓冲液稀释20倍，取200μL于微孔板的第2列中；用巴氏杀菌奶稀释氨苄青霉素标准品到50、25、12.5、6.25、3.12和1.56 ng/ml，分别取200 μL于微孔板的第4列中，另外每孔添加50μL反应液和5μL金标β‑内酰胺类抗生素受体；往微孔板的第1列中加入200μL水，往微孔板的第3列加入200 μL 巴氏杀菌奶、50 μL反应液、5μL金标BSA；用APS光纤传感器探头进行检测：第一列60s，第2列60s；第3列60s；第4列600s。