[发明专利]一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法在审
| 申请号： | 201711096019.0 | 申请日： | 2017-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN109762787A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：（1）无菌条件下切取新鲜肾癌组织；（2）组织处理器械消毒；（3）预冷PBS清洗肾癌组织3次，剔除表面血管、结缔组织；（4）剪碎组织，并用预热的胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分别消化；（5）终止消化，离心，弃上清；（6）取细胞滤液检测细胞活性；（7）用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（8）差速贴壁法去除成纤维细胞；（9）细胞形态鉴定；（10）细胞检测与鉴定。本发明提供的一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，操作简单，所得细胞数量多，成活率高，是一种理想的原代人肾癌细胞分离与培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。 | ||
| 搜索关键词： | 人肾癌细胞 肾癌组织 胰蛋白酶 差速贴壁法 成纤维细胞 完全培养基 细胞 消化 表面血管 结缔组织 器械消毒 无菌条件 细胞活性 细胞检测 细胞滤液 细胞形态 组织处理 胶原酶 培养瓶 预热的 包被 剪碎 切取 预冷 重悬 去除 成活率 剔除 接种 并用 新鲜 检测 | ||
【主权项】：
1.一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）无菌条件下切取新鲜肾癌组织，4℃密封运回实验室；（2）组织处理器械消毒；（3）无菌操作台内，预冷PBS清洗肾癌组织3次，剔除表面血管、脂肪、结缔组织；（4）剪碎组织，并用预热的胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分别消化；（5）终止消化，离心，弃上清；（6）取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；（7）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（8）差速贴壁法去除成纤维细胞；（9）细胞形态鉴定；（10）细胞存活率测定；（11）免疫学鉴定。
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