[发明专利]一种福氏紫薇组培再生体系建立的方法

摘要

本发明涉及一种福氏紫薇组培再生体系建立的方法，该方法利用福氏紫薇种子萌发获得无菌实生苗，然后剪取幼嫩叶片为外植体，通过对外植体进行脱分化培养，获得再分化能力强的愈伤组织，进而利用愈伤组织进行再分化培养和后续的生根培养实现再生植株。本发明利用无菌实生苗为外植体，避免了传统的外植体由于分化程度高而脱分化不易和污染率高的问题，操作简单、可行。具体包括以下几个步骤：1.实生无菌苗的获得；2.愈伤组织的诱导；3.愈伤组织的继代和增殖；4.愈伤组织的再分化；5.生根培养；6.植株再生。本发明中褔氏紫薇的愈伤增殖倍数达2.1倍，组培再生率达到95%以上，为紫薇遗传转化体系的建立奠定了坚实的实验基础。

主权项

1.本发明提供了一种福氏紫薇组培再生体系的方法，其特征在于，包括以下几个步骤：实生无菌苗的获得采收褔氏紫薇健康母树上发育良好的种子，人工去掉种翅并防止损伤种皮，进行消毒：先用自来水冲洗30min，然后75％乙醇处理30s； 1% 次氯酸钠灭菌 15min，然后无菌水冲洗 5次，消毒后播种于 MS 基本培养基中，获得生长健壮的实生苗；愈伤组织的诱导剪取步骤（1）中无菌培养20天的叶片，垂直叶片主脉剪 3～4 下，保持一侧叶缘相连，叶片正面朝上接种于愈伤诱导培养基中，暗培养处理7天，培养温度25℃左右，光照强度2000‑3000lx，光照时间14h/d；愈伤组织的继代和增殖将步骤（2）中获得的愈伤组织切成直径约 6‑10mm 接种于普通B5 培养基，每瓶培养基接愈伤组织5 ‑10块，暗培养，培养温度为23‑27℃,每20天继代一次，培养20天，得到愈伤组织鲜重可以增殖为原来的2.1倍；愈伤组织的分化将步骤（3）中获得的愈伤组织接种于分化培养基中进行再分化诱导，每瓶接种2块愈伤组织，每处理分别接种15瓶，培养温度为25℃，光照强度2000 ‑ 3000lx，光照时间14h/d；（5）生根培养将步骤（4）中获得的含有不定芽的无根试管苗接种于生根培养基中进行生根培养15‑20天，培养温度为23±3℃，光照时间为14 h/d，光照强度为1500‑2000lx；（6）无菌苗的炼苗将步骤（5）中获得的福氏紫薇带根无菌苗的培养瓶瓶盖打开，室内培养5‑7天，然后移栽于采用多菌灵消毒的基质中，使用带孔PVC膜覆盖保湿，放在通风阴凉处培养25‑30天，培养到第15天将PVC膜移除，换用遮光率75% ‑ 80%的遮阳网，栽培所用基质成分为体积比1 ：1的泥炭土与珍珠岩。