[发明专利]一种自身免疫性肝炎模型及利用该模型筛选的药物

摘要

本发明公开了一种自身免疫性肝炎模型及利用该模型筛选的药物。本发明首先建立了一种AAGL诱导的AIH‑like小鼠肝炎模型，该模型对于传统免疫抑制剂的治疗不敏感，可作为临床对传统免疫抑制治疗不敏感病人的动物模型。本发明进一步利用该模型筛选治疗自身免疫性肝炎的药物，结果表明醋酸格拉替雷能够显著地缓解该动物模型的自身免疫性肝炎症状，说明醋酸格拉替雷能够用于治疗自身免疫性肝炎。因此，本发明提供了醋酸格拉替雷的一种新用途，为自身免疫性肝炎的治疗提供了新的药物。

主权项

一种小鼠自身免疫性肝炎模型的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：（1）AAGL的制备：a）天然纯化：将茶树菇用ddH2O或磷酸缓冲液浸泡，浸泡液利用硫酸铵沉淀法，透析得到总蛋白；然后利用lactose‑Sepharose 6B的亲和层析柱得到目的蛋白AAGL，AAGL在ddH2O中透析过夜，透析液冻干；或者b）重组表达：将AAGL的编码cDNA序列克隆到表达载体，转入大肠杆菌中，进行表达，用lactose‑Sepharose 6B亲和纯化或者用标签亲和纯化；（2）将步骤1制得的AAGL的冻干粉末用PBS溶解，配成0.25 mg/ml的浓度，用0.22μm的滤器过滤后，按照小鼠体重尾静脉注射到C57BL/6小鼠中，3小时以后可以检测到ALT（谷丙转氨酶）和AST（谷草转氨酶）有显著增加，一直到12小时后ALT和AST缓慢下降，至24小时恢复正常水平；6‑9小时是检测肝炎症状的最佳时间；所述自身免疫性肝炎的症状包括：（1）对于传统免疫抑制剂的治疗不敏感，所述的治疗不敏感包括：治疗后症状没有减轻，或者症状加重；所述传统免疫抑制剂包括：强的松龙联合咪唑硫嘌呤、强的松龙不联合咪唑硫嘌呤、霉酚酸酯、英夫利昔、布地奈德、他克莫司或环孢霉素中的任意一种或多种；（2）肝脏组织中Treg的比率升高，同时Treg被激活，肝脏中IL‑10的表达量升高，炎性细胞在肝脏中聚集并激活；所述炎性细胞包括：T细胞、NK细胞或NKT细胞中的任意一种或多种。