[发明专利]一种大豆蛋白粉维生素D3的测定方法

摘要

本发明涉及保健食品功效成分分析技术领域，具体涉及一种大豆蛋白粉维生素D3的测定方法，其包括皂化、提取、洗涤、浓缩、净化和高效液相色谱分析步骤，其中净化步骤采用化学的方法依次对硅胶固相萃取柱进行活化、平衡、上样、淋洗和洗脱。先通过淋洗步骤将杂质除掉，然后通过洗脱步骤使维生素D3完全溶解被洗脱出来，故只需要收集洗脱液即可获得待测样品中的全部维生素D3，从而可以准确地控制维生素D3的量。与现有技术相比，本发明改良后的净化步骤非常简单、准确、易于操作而且大大降低了检测成本，具有广阔的市场应用前景。

主权项

一种大豆蛋白粉维生素D3的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤a、待测样品的处理：将待测样品，依次经过缩分、粉碎、均质后，保存备用；步骤b、皂化：称取一定量的待测样品，先加入内标使用溶液，然后加入抗氧化剂后，再加入无醛乙醇和氢氧化钾溶液，在一定温度和磁力搅拌器的作用下进行回流皂化，皂化后立即冷却至室温，得到皂化液；步骤c、提取：将皂化液转移至分液漏斗中，加入萃取剂进行萃取，合并萃取后的萃取剂层溶液；步骤d、洗涤：用水洗涤萃取剂层溶液，直至将萃取剂层溶液洗至pH值为中性，去除下层水相，得到洗涤后的萃取剂层溶液；步骤e、浓缩：将洗涤后的萃取剂层溶液收集至蒸发装置，进行蒸发浓缩，待蒸发装置内溶液近干时，然后用正己烷定容得到待测浓缩液；步骤f、净化：f1)活化：将硅胶固相萃取柱用乙酸乙酯活化；f2)平衡：用正己烷平衡硅胶固相萃取柱，使硅胶处于饱和状态；f3)上样：准确量取步骤e制备的待测浓缩液，过柱；f4)淋洗：用乙酸乙酯‑正己烷溶液淋洗，分离掉杂质；f5)洗脱：用乙酸乙酯‑正己烷溶液洗脱；f6)氮吹定容：收集洗脱液，在一定温度下氮气吹干，然后加入甲醇，涡旋一定时间，再通过滤膜过滤后，得到待测溶液；步骤g、高效液相色谱分析：将得到的待测溶液注入高效液相色谱仪进行分析。