[发明专利]从宿主细胞提取和纯化腺相关病毒和腺病毒的方法及其组分和试剂盒

摘要

本发明提供了从含有包装病毒颗粒的宿主细胞的样品中提取和纯化病毒颗粒的三级纯化的方法。三级纯化的方法包括：利用第一次分级分离溶液沉淀并去除大多数的杂质蛋白质；用第二次分级分离溶液沉淀并收集病毒颗粒，去除部分剩余杂质；收集到的病毒颗粒进一步用柱层析去除剩余杂质，得到超纯的病毒溶液。该方法还包括病毒宿主细胞的收集、细胞悬浮和细胞裂解等步骤。这种纯化方法操作简便、方便得到很高回收率的超纯度的病毒溶液、适宜于大量和小量制备，而且所用溶液和操作步骤都不含有对细胞的有毒物质。因此，这一方法展示了一种非常理想的包括腺相关病毒和腺病毒在内的载体病毒的纯化技术。本发明还包括根据上述技术设计出的试剂盒或包装。

主权项

1.一种从其包装细胞的样品中提取重组的腺相关病毒（AAV）或腺病毒（AdV）的病毒颗粒的方法，所述方法包括：用碱性裂解溶液使细胞裂解，具体是在样品中加入碱性裂解溶液，使得所述样品含有约0.1%至约1%的洗涤剂（detergent）并且pH为约9.0 至约11.5，从而使所述细胞裂解；以及用盐析溶液沉淀并去除宿主细胞的蛋白杂质，具体是在所述样品中加入盐析溶液，使得所述样品含有约0.5 M 至约2.0 M 的盐并且pH 为约4.0 至约7.0，从而使宿主细胞的蛋白沉淀。