[发明专利]一种APN基因敲除的IPEC-J2细胞的构建方法在审
| 申请号： | 201711170105.1 | 申请日： | 2017-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN108220338A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 包文斌;戴开宇;王诗琴;王海飞;吴圣龙 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;C12N15/66 |
| 代理公司： | 扬州市锦江专利事务所 32106 | 代理人： | 江平 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种APN基因敲除的IPEC_J2细胞的构建方法，属于基因工程技术领域，本发明采用CRISPR/Cas9技术敲除IPEC_J2细胞系基因组中APN基因序列，建立的APN基因敲除的小肠上皮细胞可为深入揭示腹泻病原体致病机制以及抗腹泻病转基因猪的培育和应用提供更直接有效的研究模型。 | ||
| 搜索关键词： | 基因敲除 构建 基因工程技术 细胞系基因组 小肠上皮细胞 细胞 基因序列 抗腹泻病 应用提供 致病机制 转基因猪 病原体 敲除 腹泻 培育 研究 | ||
【主权项】：
1.一种APN基因敲除的IPEC_J2细胞的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1）将5’端添加CACCG的sgRNA序列5’‑TCTGTCTGTGGTGTATGCCC‑3’和5’端添加AAAC的sgRNA序列的反向互补序列退火形成双链DNA；2）将双链DNA与线性化后的敲除载体pGK1.1连接，得到连接产物；3）以引物：F：5’‑CATATGCTTACCGTAACTTGAAAG‑3’R：5’‑GGGCATACACCACAGACAGA‑3’对连接产物进行菌落PCR筛选，经扩大培养和质粒提取，取得阳性打靶载体；4）将阳性打靶载体转染猪小肠上皮细胞，提取细胞基因组DNA，即得APN基因敲除的IPEC‑J2细胞。
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