[发明专利]一种敲除PD1的靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201711197254.7 | 申请日： | 2017-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN109837304A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 曾滢;钟春颖 | 申请（专利权）人： | 深圳宾德生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N7/01;C12N15/113;C12N5/10;A61P35/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;熊永强 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种敲除PD1的靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，包括：将嵌合抗原受体CAR‑HER2的编码基因与载体相连，进行重组慢病毒的构建，并转染CD3阳性T淋巴细胞，将转染后的T细胞的PD1基因进行敲除，得到靶向HER2嵌合抗原受体T细胞。所述靶向HER2嵌合抗原受体T细胞敲除了PD1基因，有利于T细胞在患者体内的扩增，避免肿瘤细胞逃脱免疫监视，具有高效且特异性的杀伤肿瘤细胞的性能，持久地维持细胞的活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。 | ||
| 搜索关键词： | 嵌合抗原 靶向 敲除 转染 制备方法和应用 阳性T淋巴细胞 杀伤肿瘤细胞 重组慢病毒 编码基因 免疫监视 正常细胞 肿瘤细胞 基因 构建 扩增 制备 损伤 体内 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种敲除PD1的靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞的制备方法，其特征在于，包括：(1)提供嵌合抗原受体CAR‑HER2的编码基因，包括从5’端到3’端顺次连接的信号肽的编码基因、靶向HER2的单链抗体的编码基因、胞外铰链区的编码基因、跨膜区的编码基因、胞内信号区的编码基因，其中，所述靶向HER2的单链抗体的编码基因包括编码如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的核苷酸序列；(2)将所述CAR‑HER2的编码基因插入到pWPXLD载体中，得到pWPXLD‑CAR‑HER2重组质粒；(3)包装所述pWPXLD‑CAR‑HER2重组质粒，得到重组慢病毒；(4)将所述重组慢病毒转染CD3阳性T淋巴细胞，获得嵌合抗原受体T细胞；(5)敲除所述嵌合抗原受体T细胞的PD1基因，获得敲除PD1的靶向HER2的嵌合抗原受体T细胞。
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