[发明专利]磁微粒化学发光法测定rT3含量的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明为磁微粒化学发光法测定rT3含量的试剂盒及其检测方法，试剂盒提供了一种rT3抗原衍生物的制备方法，通过制备rT3抗原衍生物和酶标rT3抗原衍生物，可以构建出生物素化rT3抗原衍生物+抗体酶标试剂+校准品与酶标rT3抗原衍生物+生物素化rT3兔多抗+校准品两个检测体系，由于酶促发光体系在不同情况下可能需要对rT3抗原进行生物素、酶标甚至蛋白等不同情况的偶联，只需要通过制备rT3抗原衍生物这个中间体就能实现。不同体系测值与给值相关性都在0.9以上，说明相关性良好，两种测定体系相关性为0.9540，说明两种测试方法相关性良好，测试结果一致。整个反应体系反应时间短，避免了放射性污染，延长了试剂效期，灵敏度高，测试结果准确，简化了实验操作流程。

主权项

1.一种磁微粒化学发光法测定人血清中rT3含量的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括生物素化rT3抗原衍生物、抗体酶标试剂、酶标rT3抗原衍生物、生物素化rT3兔多抗和校准品；所述试剂盒中主要组分按照如下制备方法制得：一、rT3抗原衍生物制备过程:1)、分别配置pH＝5.0的0.05M的MES缓冲液和PH＝9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液；2)、将rT3用MES缓冲液溶解，得到浓度为5mg/ml的rT3溶液；3)、将EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)用0.05M的MES缓冲液溶解，得到浓度为10mg/ml的EDC缓冲液；4)、配制终浓度为5mg/ml的PH＝10.0的乙二胺二盐酸盐溶液；5)、将5mg/ml的rT3溶液加入EDC缓冲液300ul，室温反应3h；6)、取0.1ml乙二胺二盐酸盐溶液加入到步骤5)中的反应完成后的体系中，并混匀，室温反应1h；7)、用截留分子量为500的透析袋透析步骤6)中的反应产物，透析缓冲液为PH＝9.0的0.1M的NaHCO3缓冲液；透析后产物收集备用；二、生物素化rT3抗原衍生物制备过程:将生物素-NHS用DMSO进行溶解后，按照rT3抗原衍生物与生物素-NHS摩尔比为1:18～22加入步骤一所得的rT3抗原衍生物，充分混匀后室温反应2h；用透析袋透析反应产物，将透析液稀释至工作液浓度；三、抗体酶标试剂制备过程：将rT3兔多抗体和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；四、酶标rT3抗原衍生物制备过程：将rT3抗原衍生物和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2-8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；五、生物素化rT3兔多抗制备过程：1)将生物素-NHS，用DMSO进行溶解得到DMSO溶解的生物素，加入rT3兔多抗，充分混匀后室温反应2h；透析后将透析液稀释至工作液浓度。