[发明专利]一种子宫内膜干细胞的分离培养方法及其专用培养基

摘要

本发明涉及一种子宫内膜干细胞的分离培养方法，包括洗涤、消化、原代培养和传代培养步骤，其中原代培养过程中，培养3‑8h，将培养皿中未贴壁细胞移入新的培养皿，更换培养基后继续培养3‑4天，然后收取贴壁细胞并标记P01代细胞，将培养基中未贴壁细胞移入新的培养皿，更换培养基后继续培养4‑6天，收取贴壁细胞，并标记为P02代细胞；在传代培养过程中，第一代采取P01代细胞和P02代细胞分别独立培养的方法，在第二代之后，进行混合培养。采用上述方法，得到的子宫内膜干细胞得率高、纯度高，得到的子宫内膜干细胞可进行多次传代，多次传代后得到的干细胞具有高度分化的潜能。

主权项

1.一种子宫内膜干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)洗涤：在无菌条件取得离体子宫内膜，用氯化钠注射液进行漂洗；2)消化：将步骤1)所得的子宫内膜切成1‑2mm³碎块，加入消化液于37℃消化处理1‑2h，消化终止后，于氯化钠注射液中漂洗，离心分离，得到的沉淀再用氯化钠注射液进行洗涤吹打均匀后，过40μm细胞筛，收集滤液，离心弃上清，得细胞沉淀；3)原代培养：向步骤2)所得的细胞沉淀中加入培养基，得到单细胞悬液，按照4‑5×10⁴个/mL的浓度，接种于培养皿中，培养3‑8h，将培养皿中未贴壁细胞移入新的培养皿，更换培养基后继续培养7‑10天，收取贴壁细胞，标记为P₀代细胞；其中所述培养基为包括10％胎牛血清、8‑15ng/mLEGF和8‑15ng/mLPDGF‑BB的DMEM‑F12培养基。