[发明专利]一种体外诱导抗原特异性T细胞的方法

摘要

本发明涉及一种扩增抗原特异性调节性T细胞的方法，属于生物技术领域。本发明采用Rapamycin联合TGF‑β细胞DC细胞的作用下体外诱导人的T细胞成为具有免疫抑制功能的调节性T细胞，具有以下优点：1)数量充分；2)能抵抗Th17细胞分化；3)较其他方法诱导的调节性T细胞具有更强的抑制功能与生物学作用。克服了自然调节性T细胞的诸多缺陷，在炎症性疾病，自身免疫性疾病治疗和器官移植免疫排斥的预防方面有更大的治疗优势。

主权项

1.一种体外诱导抗原特异性T细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一，采血：采用肝素抗凝常规采血手段采集血液；步骤二，分离：从采集到的血液中离心分离出外周淋巴细胞，再由外周血淋巴细胞分离得到原始CD4+CD45RA+T细胞；步骤三，准备DC细胞：使用CD14标记流式分选DC细胞，并用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与白细胞介素-4(il-4)预处理DC细胞；步骤四，第一次扩增T细胞：使用辐照处理的所述步骤三中的DC细胞激活T细胞；步骤五，第二次扩增T细胞：第11天根据细胞浓度，再次加入辐照处理的DC细胞、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-15(IL-15)和转化生长因子-β(TGF-β)对所述步骤四中的T细胞重新刺激，促进T细胞的再次激活扩增，培养至细胞数达到目的扩增量，收集细胞，得到CD4+CD25+调节性T细胞。