[发明专利]一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷含量的培养方法

摘要

本发明公开了一种提高防风愈伤组织中亥茅酚苷含量的培养方法，将防风愈伤组织均匀切成若干小堆，接种于盛有琼脂培养基的容器中，培养28‑32d后，收集培养物并干燥，其中：1L所述琼脂培养基还添加有2‑4g酵母提取物。本发明提供的培养方法可以显著提高防风愈伤组织中的亥茅酚苷含量；本发明提供的防风愈伤组织富含亥茅酚苷，可以用作制备亥茅酚的原料；以组织培养的方法制备得到的防风愈伤组织成本低，可以规模化制备，且质量可控，可以克服现有技术中防风药材越来越紧张的不足。

主权项

1.一种以酵母提取物培养的防风愈伤组织为原料制备亥茅酚的方法，其特征在于：酵母提取物培养的防风愈伤组织的培养方法为：将未用酵母提取物培养的防风愈伤组织均匀切成若干小堆，接种于盛有琼脂培养基的容器中，1L所述琼脂培养基添加有2‑4g酵母提取物，培养28‑32d后，收集培养物并干燥；制备亥茅酚的方法包括如下步骤：步骤S1，将酵母提取物培养的防风愈伤组织喷洒pH值为6.0的酸水过夜，105℃高温蒸制3h；酸水为盐酸水溶液，1kg愈伤组织均匀喷洒15mL盐酸水溶液；过夜指不少于8h；步骤S2，将蒸制品用75%乙醇水溶液提取，收集提取液，过滤，收集滤液；步骤S3，滤液上大孔树脂柱富集，大孔树脂型号为AB‑8，先用45%乙醇水溶液洗脱8个柱体积，再用55%乙醇水溶液洗脱，收集第4和第5个柱体积洗脱液，浓缩得亥茅酚粗品；步骤S4，第一次精制：将粗品用pH为7.7的氢氧化钠溶液搅拌混悬，过滤，滤液用盐酸调节pH至6.5后立即过滤得二滤液，将该二滤液置于4℃低温过夜；过夜指不少于8h；步骤S5，第二次精制：将低温过夜的溶液过滤，收集滤饼，用体积比3:2的甲醇‑丙酮溶液重结晶，先用甲醇‑丙酮溶液将滤饼超声溶解，再于通风橱静置析晶，析出物洗涤干燥即得。