[发明专利]一种用于双向电泳的香菇菌丝体总蛋白提取和分离方法

摘要

本发明涉及一种用于双向电泳的香菇菌丝体总蛋白提取和分离方法，包括采用TCA/丙酮法提取，再对TCA/丙酮法提取的总蛋白质进行上样量及凝胶浓度进行优化。本发明得到的双向电泳图谱分离效果较好，蛋白质点的数目明显增加，呈现圆形或者椭圆形，横向和纵向条纹较少，分布均匀并且没有拖尾现象，为研究香菇菌丝体蛋白组学提供技术支持，同时，也为大型食用真菌菌丝体蛋白质组学研究提供理论依据。

主权项

1.一种用于双向电泳的香菇菌丝体总蛋白提取和分离方法，包括：(1)将培养好的香菇菌丝体过滤，在液氮中速冻；然后研磨成粉，加入-20℃预冷的TCA/丙酮溶液涡旋，-20℃静置过夜沉淀蛋白，离心弃上清；再加入-20℃预冷的丙酮溶液涡旋，-20℃静置1～2h，离心弃上清，冷冻干燥，得到香菇菌丝体总蛋白；(2)取香菇菌丝体总蛋白，加入蛋白质裂解液溶解，震荡、离心，取上清，得到蛋白样品；定量蛋白样品，然后在胶条上进行等电聚焦；取出胶条，进行平衡，将处理完成的胶条转移至凝胶顶端，用琼脂糖封胶液封顶，进行第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；最后将所得到的凝胶洗涤固定、考马斯亮蓝染色液染色，得到双向电泳图谱。