[发明专利]一种测定生防细菌代谢产物拮抗活性的方法

摘要

本发明公开了一种测定生防细菌代谢产物拮抗活性的方法，通过制备含有细菌抑制剂的病原真菌或生防真菌孢子悬浮液、制备含有细菌抑制剂的生防细菌发酵液、共培养、抑菌圈测定等简易程序进行抗菌活性测定。本发明具有技术上的创新性，可替代目前常见的过滤法等测定拮抗活性的方法，既能真实反应生防细菌代谢产物的活性，又具有试验稳定性好、重复性好、操作简便、抗污染能力强、周期短和效率高等优点，可简便快速的实现多种生防细菌对多种病原真菌/生防真菌的拮抗活性的大量测定，有利于快速评价生防细菌对病原真菌/生防真菌的拮抗活性，对研制复合生防细菌和生防真菌制剂也具有重要意义。

主权项

1.一种测定生防细菌代谢产物拮抗活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备含有细菌抑制剂的植物病原真菌或生防真菌孢子悬浮液：分别取植物病原真菌或生防真菌的孢子悬浮液，添加至少一种细菌抑制剂，即获得含有细菌抑制剂的植物病原真菌或生防真菌孢子悬浮液；2)制备含有细菌抑制剂的生防细菌发酵液：取生防细菌发酵液，添加至少一种细菌抑制剂，即获得含有细菌抑制剂的生防细菌发酵液；3)共培养：(1)取含有细菌抑制剂的植物病原真菌或生防真菌孢子悬浮液，加入熔化状态的培养基，混匀后倒入培养皿，培养基凝固后进行预培养，然后用打孔器在距离培养皿中心位置等距离打孔；(2)取含有细菌抑制剂的生防细菌发酵液加入步骤(1)中打出的孔内，继续进行培养；4)抑菌圈测定：待病原菌生长2‑3d后测量培养基上孔周围的抑菌圈直径，观察抑菌圈透明程度；细菌抑制剂的添加量不低于10μg/mL，共培养步骤中每孔加入不低于10μL的含有细菌抑制剂的生防细菌发酵液；所述步骤1)中的植物病原真菌或生防真菌孢子悬浮液浓度不低于2.2×107个/mL；所述植物病原真菌包括胶孢炭疽菌和辣椒疫霉；所述生防真菌包括淡紫拟青霉和绿色木霉；所述生防细菌包括芽孢杆菌。