[发明专利]检测MSI的非诊断方法

摘要

本发明公开检测MSI的非诊断方法。从血液分离血浆和白细胞，并提取血浆中的ctDNA，和白细胞中的gDNA；分别以ctDNA和gDNA为模板建立测序文库和标准文库并测序；在测序文库和标准文库中分别确定各位点中重复单元的序列，并分别统计各序列长度，计算各序列长度的相对频率分布，去除序列长度等于300bp及测序文库与标准文库共有的序列长度的相对频率，以各位点在测序文库和标准文库中的相对频率绘制分布曲线，根据两条曲线是否趋势一致判断是否存在MSI。本发明的方法能够有效检测血液中肿瘤细胞的微卫星不稳定状态，而不依赖于肿瘤组织，从而减轻患者取样时的痛苦，检测方便快捷。

主权项

1.一种检测MSI的非诊断方法，其包括以下步骤：(1)样品制备步骤：从血液分离血浆和白细胞，并提取血浆中的ctDNA作为待检测样品，和白细胞中的gDNA作为标准样品；其中所述gDNA的含量低于所述ctDNA的1/3；(2)文库构建步骤：以所述ctDNA为模板建立测序文库，同时以所述gDNA为模板建立标准文库，其中各文库建立时用于PCR扩增的引物组由SEQ ID NO:1-14组成；(3)文库测序步骤：以相同的方法分别对所述测序文库和所述标准文库进行测序；(4)测序结果的分析步骤，其中包括在所述测序文库和所述标准文库中分别确定各位点中重复单元的序列，并分别统计各序列长度，计算各序列长度的相对频率分布，去除序列长度等于300bp及所述测序文库与所述标准文库共有的序列长度的相对频率，以各位点在所述测序文库和所述标准文库中的相对频率绘制分布曲线，并根据两条曲线是否趋势一致判断是否存在MSI。