[发明专利]一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法

摘要

本发明提供一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法，其首先提取未辐照以及待测土豆的DNA样本，使用4对鉴别引物对DNA样本进行实时定量PCR的Livak分析，获得DNA片段组合间倍数关系，通过两种鉴别标准鉴别样本是否符合辐照损伤特征；然后使用2对引物对符合辐照特征的DNA样本进行实时PCR分析，获得DNA片段组合间倍数的对数，通过两种判定标准判定待测土豆样本是否经过辐照处理，最终实现对土豆的定性辐照鉴定。与“彗星DNA法”相比，可提高辐照食品定性鉴定的灵敏度和结果可靠性，对辐照食品生产和辐照加工企业的质量安全控制、食品安全监督部门、进出口检验检疫部门食品辐照鉴定业务均有可行性和重要的应用价值。

主权项

一种通过PCR技术判定土豆是否辐照的方法，其特征在于：所述方法包括下述步骤：A、提取样本总DNA：取同一批次的未辐照土豆样本、待检土豆样本至少各三个，分别提取未辐照土豆样本总DNA和待检土豆样本总DNA；B、获取未辐照土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数的平均数：将步骤A中提取的每个未辐照土豆样本总DNA采用至少含2组引物对的引物对组合进行实时定量PCR检测，通过Livak分析，分别得到至少3个未辐照样本土豆总DNA中待检测片段之间的相对倍数的对数，并计算得到未辐照土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数的平均数；所述含2组引物对的引物对组合如下：P1‑P2引物对组合，其序列为：P1：5’ATTCGGCCTAGCTCTGTGAC 3’，5’TGAGATGCCCAACTGCATGA 3’；P2：5’AACGATGAGTGTTCGCCCTT 3’，5’GGCAATCTTTCCGGATTCGC 3’P3‑P4引物对组合，其序列为：P3：5’AGCACTACCGGTGGAAGGTA 3’，5’TTAGCCAAAGGTCGCTTGGA 3’；P4：5’ACGGGAAATTGTCCGCGATA 3’，5’AAAATCAGGCAACGGTCCCA 3’；P5‑P6引物对组合，其序列为：P5：5’ATTCGGCCTAGCTCTGTGAC 3’，5’TGAGATGCCCAACTGCATGA 3’；P6：5’AACGATGAGTGTTCGCCCTT 3’，5’GGCAATCTTTCCGGATTCGC 3’；C、获取鉴定方法检限；所述鉴定方法检出限为空白标准偏差的3倍；D、按照步骤B操作和引物对组合获取待检土豆样本总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数的对数；E、判断土豆是否辐照：当采用P1‑P2引物对组合、P3‑P4引物组合中任意一组或2组获得的待检土豆样本待检测片段分布数量的相对倍数的对数与未辐照土豆对应组合的相对倍数的对数的平均数的差的绝对值大于空白标准偏差的3倍时，待检土豆样本DNA损伤不符合辐照特征，可作为干扰样本排除；当采用P1‑P2引物对组合和P3‑P4引物组合获得的待检土豆的两个相对倍数值的对数与未辐照土豆对应组合的相对倍数的对数的平均数的差的绝对值同时小于等于空白标准偏差的3倍，且采用P5‑P6引物对组合获得的未辐照土豆相对倍数的对数的平均数与待检土豆对应组合相对倍数的对数的差小于空白标准偏差的3倍时，待检土豆样本未接受辐照处理，大于等于空白标准偏差的3倍时，待检土豆样本经过辐照；其中，所述土豆总DNA中待检测核酸片段之间分布数量的相对倍数等于：以2为底，以引物对组合中的两对引物定量PCR得到的初始循环数的差的绝对值为指数的指数函数值。