[发明专利]一种表达新型鸭细小病毒VP3基因的重组新城疫病毒及其应用

摘要

本发明提供了一种表达新型鸭细小病毒VP3基因的重组新城疫病毒及其应用，利用已建立的新城疫病毒PHY.LMV42株的反向遗传操作平台，将新型鸭细小病毒的VP3基因ORF插入NDV全长转录载体pLMV‑RFP，构建出重组质粒pLMV‑NDPV‑VP3，该重组质粒与三个辅助质粒共转染BHK‑21细胞后，获得了具有较高繁殖性能的表达NDPV‑VP3蛋白的重组疫苗株rLMV‑NDPV‑VP3。NDPV‑VP3基因位于新城疫病毒P基因和M基因之间非编码区，经反向遗传技术获得重组病毒rLMV‑NDPV‑VP3。该表达新型鸭细小病毒VP3基因的重组新城疫病毒可用于新型鸭细小病毒病和鸭新城疫的预防。

主权项

1.一种表达新型鸭细小病毒VP3基因的重组新城疫病毒，其特征在于该重组新城疫病毒是通过以下方法构建的：1)取鸭细小病毒，利用RT-PCR方法扩增得到NDPV-VP3基因，回收PCR产物，连接至pMD18-T-Vector；2)将NDPV-VP3基因与pLMV-RFP线性化载体相连接，并将连接产物转化至Stbl2感受态细胞，筛选出阳性克隆，即得到重组NDV病毒质粒；3)将表达T7聚合酶的重组痘病毒vTF7-3以MOI＝3的滴度接种于单层BHK-21细胞的24孔板内，孵育1h后，将pLMV-VP3、pcDNA-NP、pcDNA-P及pcDNA-L质粒共转染BHK-21细胞，转染72h后，将收获拯救的重组病毒接种10日龄SPF鸡胚，收获HA、HI检测均为阳性的鸡胚尿囊液，即得到重组新城疫病毒rLMV-NDPV-VP3。