[发明专利]一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法

摘要

本发明公开了一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法。本发明的快速检测方法以Au‑Pt‑SiO2复合纳米微球为载体通过结合抗体和酶形成信号转导探针；用免疫磁性探针的超顺磁性对样品中目标物进行富集和分离；将被检测的目的菌大肠埃希氏菌O157:H7的信号转换为葡萄糖分子的信号，用便携式血糖仪读出。本发明基于血糖仪和两种纳米复合物捕获探针和信号转导探针，构建一种新型的经济、简便、快速、灵敏的检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7的新方法。

主权项

1.一种非诊断目的的大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用鼠抗大肠埃希氏菌O157:H7抗体对Fe3O4/SiO2核壳结构的磁性纳米颗粒表面进行修饰，得到免疫磁性探针；(2)将Au‑Pt纳米微球修饰到二氧化硅纳米颗粒(SiNPs)表面，得到Au‑Pt‑SiO2复合纳米微球(APS NPs)；(3)以步骤(2)制备得到的Au‑Pt‑SiO2复合纳米微球(APS NPs)为载体结合大肠埃希氏菌O157:H7抗体和蔗糖酶，得到信号转导探针；(4)取待测样品，用血糖仪检测待测样品中的葡萄糖初始浓度C1，然后将步骤(1)制备得到的免疫磁性探针加入到待测样品的菌悬液中于37℃孵育一定时间，经洗涤、磁性分离，将磁性复合物A分离出来；(5)在步骤(4)分离得到的磁性复合物A中加入步骤(3)制备得到的信号转导探针并于37℃孵育一定时间，经洗涤、磁性分离，将磁性复合物B分离出来；(6)在步骤(5)得到的磁性复合物B中加入蔗糖溶液，在55℃下静置反应一定时间后用血糖仪检测体系的葡萄糖浓度C2；根据葡萄糖浓度的变化差值ΔC为纵坐标，大肠埃希氏菌O157:H7浓度的对数值为横坐标的标准曲线，能够计算出样品中大肠埃希氏菌O157:H7的含量，其中，ΔC＝C2‑C1。