[发明专利]一种目标区域多重PCR与快速文库构建的方法有效
| 申请号： | 201711347145.9 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN108103143B | 公开（公告）日： | 2021-11-09 |
| 发明（设计）人： | 胡春旭;陆思嘉;任军 | 申请（专利权）人： | 序康医疗科技（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/686;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人： | 黄革生 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于遗传学与精准医学领域，涉及到一种靶向特异区段超高重PCR与快速文库构建的新方法。本发明能在2‑3小时内,由2.5‑50ng经提取的DNA为模板获得符合下游分析要求的高质量文库，并且在建库过程中引物端自动加上样本区分barcode，无需二次建库。下机数据各扩增子均一性高，1M Reads前提下，99.5％扩增子上的热点达到1200X覆盖；特异性高，100％的靶序列均能被有效扩增。本发明文库接头的添加具有方向性，可提高数据利用率和文库质量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 目标 区域 多重 pcr 快速 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种通过多重PCR扩增DNA并构建文库的方法，包括：(1)获取样本DNA(2)使用添加了锚定接头且经过修饰的特异性引物对的集合，对步骤(1)得到的样本DNA进行第一轮PCR，所述添加了锚定接头且经过修饰的特异性引物对具有如下结构:5’修饰的锚定接头序列+针对待扩增区域的特异性序列(3)不添加新的引物，将步骤(2)得到的产物在新的反应体系中进行第二轮PCR，使得全部引物被用于扩增，(4)使用特殊设计的文库构建引物对，以所述特异性引物对上的特殊接头为引物锚定区域，进行扩增的同时在包含目标基因/区段的扩增子两端加上文库接头，所述文库构建引物对包含的引物具有如下结构(5’到3’)5’修饰的文库接头+锚定接头序列(5)构建文库。
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