[发明专利]一种相同供体来源人间充质干细胞的多批次原代分离方法

摘要

本发明公开了一种相同供体来源人间充质干细胞的多批次原代分离方法，属于细胞培养领域。本发明方法是将供体组织处理后得到1‑5mm3的供体组织小块，通过胎牛血清或人AB血清浸泡处理，然后进行常规的组织块贴壁培养。收获间充质干细胞的同时，对供体组织块进行转板连续培养，并将组织块的培养上清回收继续孵育，实现来自同一供体的人间充质干细胞的高质量、多批次稳定分离。本发明所得细胞的形态、增殖及分化能力、免疫表型在各批次间均保持不变。与传统的组织块贴壁法和酶消化法相比，本发明方法避免了临床标本资源的浪费，节省了临床环节的人力物力，还提高了间充质干细胞的分离效率和产量。

主权项

1.一种相同供体来源人间充质干细胞的多批次原代分离方法，其特征在于，包括下列步骤：无菌采集供体组织并进行处理；将处理后的供体组织剪碎，得到1‑5mm3的供体组织小块；用胎牛血清或人AB血清浸泡供体组织小块5‑20min；将供体组织小块接种到细胞培养板中，并添加适量完全培养基，进行培养；当游离出的贴壁细胞生长至80％‑90％融合时，收获原代间充质干细胞；收获原代间充质干细胞的同时，对原代培养体系中的供体组织小块和培养上清进行回收再处理；其中供体组织小块重复进行上述的胎牛血清或人AB血清浸泡5‑20min及后续的处理，继续收获间充质干细胞；原代培养上清转移到新的细胞培养瓶中再次孵育培养，继续收获间充质干细胞。