[发明专利]采用线性洗脱步骤的重组融合蛋白纯化方法有效
| 申请号： | 201711351111.7 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN109929027B | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 赵燕燕;陶文杰;刘丽丽;王鑫;王广珺 | 申请（专利权）人： | 山东博安生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/71 | 分类号： | C07K14/71;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36 |
| 代理公司： | 北京北翔知识产权代理有限公司 11285 | 代理人： | 孙占华;冯冲 |
| 地址： | 264670 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种VEGF捕获剂融合蛋白的纯化方法，其包括以下步骤：(1)Protein A亲和层析；(2)阴离子交换层析；和(3)阳离子交换层析。本发明的纯化方法很好的避免在阳离子交换层析中洗脱蛋白过程中发生蛋白聚集，从而很大程度减少了纯化方法的步骤。 | ||
| 搜索关键词： | 采用 线性 洗脱 步骤 重组 融合 蛋白 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种VEGF捕获剂融合蛋白的纯化方法，其包括以下步骤：(1)Protein A亲和层析用含盐的平衡缓冲液对亲和层析柱进行平衡，将含有由SEQ ID NO:1编码的VEGF捕获剂融合蛋白的细胞培养上清进行上样，使所述融合蛋白吸附于Protein A亲和层析介质上，上样结束后用所述含盐的平衡缓冲液进行冲洗，再用不含盐的缓冲液对蛋白进行洗脱，收集洗脱液；(2)阴离子交换层析用含盐的平衡缓冲液对阴离子交换层析柱进行平衡，将步骤(1)处理后的蛋白液调节至pH8.30‑8.50后进行上样，使融合蛋白吸附于阴离子交换层析介质上，上样结束后用Tris缓冲液进行冲洗，再用Bis‑Tris缓冲液对蛋白进行洗脱，收集洗脱液；(3)阳离子交换层析用Tris‑MES平衡缓冲液对阳离子交换层析柱进行平衡，将从步骤(2)收集的蛋白液调节至与平衡缓冲液一致后进行上样，使所述融合蛋白吸附于阳离子交换层析介质上，上样结束后用平衡缓冲液进行冲洗，此后进行线性洗脱，收集洗脱液；其中，所述线性洗脱以23‑100％洗脱缓冲液、4‑10个柱体积的方式进行。
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