[发明专利]一种固定化纤维素酶的制备及其酶水解纤维素的方法

摘要

本发明提供了一种固定化纤维素酶的制备及其酶水解纤维素的方法。制备固定化纤维素酶的方法为交联包埋法，以海藻酸钠为载体，利用海藻酸钠中OH‑和COOH‑的氧原子与Ca2+发生离子交换反应的原理形成凝胶，戊二醛为交联剂，聚乙二醇为致孔剂和亲水剂，加入聚乙二醇可以提高固定化纤维素酶的酶活固定率和酶活力、降低米氏常数、提高载体表面的孔密度，增加酶水解反应的还原糖含量、酶水解得率和TS降解率。在固定化酶水解纤维素的过程中，可以实现纤维素酶的多次循环利用。本发明的制备及应用方法操作简便、固定条件温和、投资低、对环境友好。

主权项

1.一种固定化纤维素酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：准确称取纤维素酶粉末溶于纯水中，使其浓度为2.5-12.5mg/ml，待用；准确称取戊二醛配置成质量分数为1％戊二醛溶液，待用；准确称取海藻酸钠和聚乙二醇加入pH为4.8的酸性缓冲溶液中，室温下混合均匀后，形成海藻酸钠-聚乙二醇溶液，待用；其中海藻酸钠与聚乙二醇的质量比为1:0.5～1:2.5，海藻酸钠溶液的质量分数为1.0-6.0％，聚乙二醇分子量为1000-6000；准确量取上述海藻酸钠-聚乙二醇溶液，依次加入上述纤维素酶溶液和戊二醛溶液，混合均匀后，于150r/min振荡30min，之后于4℃静置反应4h；反应后混合液中海藻酸钠-聚乙二醇溶液：纤维素酶溶液：戊二醛溶液的体积比为5:1:(0.5～2.5)；将上述混合液逐滴加入至质量分数为0.5-4％的CaCl2溶液中，于30-80℃固定0.5-7.5h，过滤；更换新的CaCl2溶液后，0-6℃静置硬化1-3h；之后用NaCl溶液洗涤，滤纸吸干表面水分，4℃以下保存。