[发明专利]利用金属亲和法快速进行液相靶标SELEX筛选的方法在审

专利信息
申请号: 201711421464.X 申请日: 2017-12-25
公开(公告)号: CN108004246A 公开(公告)日: 2018-05-08
发明(设计)人: 宦怡;任静;黄旭方;文娣娣;仲津漫;张振华;赵娓娓;马婉玲 申请(专利权)人: 中国人民解放军第四军医大学
主分类号: C12N15/115 分类号: C12N15/115;C12N15/10
代理公司: 西安新思维专利商标事务所有限公司 61114 代理人: 李罡
地址: 710032 *** 国省代码: 陕西;61
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摘要: 发明涉及利用金属亲和法快速进行液相靶标SELEX筛选的方法。现有SELEX筛选技术存在分离时间长、步骤繁琐的缺陷。本发明人工合成单链DNA文库和相应引物;建立融合表达组氨酸标签的重组蛋白基因工程菌株;在表达融合蛋白时利用镍离子或钴离子两种金属螯合物对组氨酸标签蛋白的亲和作用使与特异性靶蛋白结合的ssDNA进行筛选;经过多轮的筛选使与靶蛋白结合的适配子得到富集,对富集的寡核苷酸进行鉴定、测序后,选择高亲和力的核酸适配子成为待选适配子。本发明简单高效快速,明显改善了蛋白质需要包被过夜的过程,设备简单,能够从复杂液相标本中筛选针对差异成分的寡核苷酸适配子,也可利用富集的文库对差异成分进行钓取鉴定。
搜索关键词: 利用 金属 亲和 快速 进行 靶标 selex 筛选 方法
【主权项】:
1.利用金属亲和法快速进行液相靶标SELEX筛选的方法,其特征在于:包括以下操作:人工合成单链DNA寡核苷酸文库和相应的引物;建立融合表达组氨酸标签的重组蛋白基因工程菌株;在表达融合蛋白的过程中利用镍离子或钴离子两种金属螯合物对组氨酸标签蛋白的亲和作用使与特异性靶蛋白结合的ssDNA进行筛选;经过多轮的筛选使与靶蛋白结合的适配子得到富集,对富集的寡核苷酸进行鉴定、测序后,选择高亲和力的核酸适配子成为待选适配子。
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