[发明专利]用于测定转肽酶A活性的多肽探针对、测定转肽酶A活性的方法及二者的应用

摘要

本发明提供了一种用于测定转肽酶A活性的多肽探针对、测定转肽酶A活性的方法及二者的应用，涉及生物检测技术领域，本发明提供的用于测定转肽酶A活性的多肽探针对，包括具有反应区、互补区和染料结合区的第一多肽探针和第二多肽探针，具有特异性强、准确度好、灵敏度高的优点，无需进行修饰或标记处理，就能够达到测定转肽酶A活性的目的。本发明提供的测定转肽酶A活性的方法，包括将上述的用于测定转肽酶A活性的多肽探针对与待测样本于转肽反应缓冲液中混合并孵育，再用双砷染料来标记孵育后的反应产物，通过孵育后的反应产物与双砷染料结合形成复合物的荧光水平来判定转肽酶A的活性，操作简单、方便。

主权项

1.一种用于测定转肽酶A活性的多肽探针对，其特征在于，所述多肽探针对包括第一多肽探针和第二多肽探针；

所述第一多肽探针和第二多肽探针分别包括反应区、互补区和染料结合区；

所述反应区用于参与转肽酶A介导的转肽反应，使所述第一多肽探针和第二多肽探针结合为嵌合多肽；所述互补区用于使所述嵌合多肽自组装成发夹结构；所述染料结合区用于结合染料。

2.根据权利要求1所述的多肽探针对，其特征在于，所述互补区为可形成发夹结构的多肽片段。

3.根据权利要求1所述的多肽探针对，其特征在于，所述第一多肽探针的反应区的氨基酸序列为LPXTGX，所述第一多肽探针的互补区的氨基酸序列为PSQPTYPG，所述第一多肽探针的染料结合区的氨基酸序列为CC；

其中，所述第一多肽探针的反应区的氨基酸序列LPXTGX中的X为除半胱氨酸外的任意一种氨基酸；

优选地，所述第一多肽探针的反应区的氨基酸序列为LPATGG。

4.根据权利要求1所述的多肽探针对，其特征在于，所述第二多肽探针的反应区的氨基酸序列为GG，所述第二多肽探针的互补区的氨基酸序列为VEDLIRFYDNLQQYLNV，所述第二多肽探针的染料结合区的氨基酸序列为CC。

5.根据权利要求1所述的多肽探针对，其特征在于，所述第一多肽探针具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述第二多肽探针具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求1‑5任一项所述的多肽探针对，其特征在于，所述染料为双砷染料；

优选地，所述染料为FlAsH‑EDT₂、ReAsH‑EDT₂、F2FlAsH或F4FlAsH。

7.一种测定转肽酶A活性的方法，其特征在于，包括：

将权利要求1‑6任一项所述的用于测定转肽酶A活性的多肽探针对与待测样本于转肽反应缓冲液中混合并孵育，得到反应产物，通过所述反应产物与双砷染料结合形成复合物的荧光水平来判定转肽酶A的活性。

8.根据权利要求7所述的测定转肽酶A活性的方法，其特征在于，所述转肽反应缓冲液中包含还原剂，所述还原剂优选为二硫键还原剂，更优选为DTT。

9.根据权利要求7或8所述的测定转肽酶A活性的方法，其特征在于，所述转肽反应缓冲液包括：Tris·HCl 40‑60mmol/L、NaCl 120‑180mmol/L、CaCl₂ 1‑10mmol/L和DTT 0.5‑1.5mmol/L；

优选地，所述转肽反应缓冲液主要由如下组分组成：Tris·HCl 45‑55mmol/L、NaCl 130‑170mmol/L、CaCl₂ 2‑7mmol/L和DTT 0.7‑1.3mmol/L。

10.如权利要求1‑6任一项所述的用于测定转肽酶A活性的多肽探针对或权利要求7‑9任一项所述的测定转肽酶A活性的方法在测定革兰氏阳性菌的潜在致病能力中的应用。