[发明专利]一种重组猪α-干扰素、其制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201711444512.7 | 申请日： | 2017-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN108179151A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 王雷;凌红丽;魏波;曲信芹;刘晓婧;孙亚磊;蒋贻海;王艳玲;王宏华;于春梅;蒋皓静;武利利 | 申请（专利权）人： | 青岛蔚蓝生物股份有限公司;青岛动保国家工程技术研究中心有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/21;C12N1/21;C07K14/56;A61K38/21;A61P31/12;A61P35/00;A61P37/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 青岛清泰联信知识产权代理有限公司 37256 | 代理人： | 李祺;高洋 |
| 地址： | 266000 山东省青岛市崂山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提出一种重组猪α‑干扰素、其制备方法及其应用，属于基因工程领域，该重组猪α‑干扰素具有高抗病毒活性，可有效应用于畜禽病毒性传染病防控方面。该技术方案包括通过对猪α‑干扰素基因优化、RNA二级结构优化及某些常见内切酶位点消除后克隆至pET‑23b(+)载体上转化大肠杆菌进行诱导表达，经包涵体分离变性纯化复性后，获得重组猪α‑干扰素。本发明提供的重组猪α‑干扰素效价很高，抗病毒活性可达1010U/mg，能够有效应用在预防和治疗畜禽病毒性疾病方面。 | ||
| 搜索关键词： | 重组猪α -干扰素 干扰素 制备 畜禽病毒性传染病 高抗病毒活性 基因工程领域 治疗畜禽病毒 大肠杆菌 干扰素基因 干扰素效价 抗病毒活性 变性纯化 有效应用 诱导表达 包涵体 内切酶 性疾病 复性 位点 应用 优化 克隆 预防 转化 | ||
【主权项】：
1.一种重组猪α‑干扰素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：选择GenBank登录号为28623的猪α‑干扰素基因序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；翻译SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，翻译后的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列按照大肠杆菌密码子进行优化，消除常规限制性内切酶酶切位点，并对其RNA二级结构进行优化，优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；在SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列两端分别加入NdeI和EcoRI位点并克隆到pGEM‑T easy载体中，挑取阳性克隆后进行测序鉴定，得到质粒pGEM‑pigIFNa1；利用NdeI和EcoRI限制性内切酶将质粒pGEM‑pigIFNa1中的猪干扰素pigIFNa1切下，琼脂糖凝胶电泳回收523bp片段，克隆到预先以NdeI和EcoRI限制性内切酶酶切的氨苄青霉素抗性载体中，挑取阳性克隆进行测序鉴定，得到重组质粒pET23‑pigIFNa1；将重组质粒pET23‑pigIFNa1转化感受态大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达，收集表达菌体，经超声破碎后，得到包涵体，将所得包涵体洗涤、变性、复性，再经亲和层析纯化，得到重组猪α‑干扰素。
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