[发明专利]一种应用于绝经期综合征的间充质干细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种应用于绝经期综合征的间充质干细胞的制备方法：步骤1、分离；步骤2、初处理；步骤3、过滤；步骤4、接种和培养；步骤5、传代；步骤6、细胞冻存；步骤7；细胞复苏。本发明拟从原料采集开始直至细胞制备完成的全过程进行统一、系统监控，从胎盘组织采集前的筛选开始直至细胞制备成成品中间品及终产品的质量全部受控。

主权项

1.一种应用于绝经期综合征的间充质干细胞的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：步骤1：分离：取合格的胎盘，将胎盘用无菌盐水冲洗后，小心分离胎盘和羊膜，加入华尔通胶，剪碎成组织小块。步骤2：初处理：洗去组织小块中的血液成分，剔除组织小块上的血管组织和滋养层组织，再加入胶原酶，置于37℃恒温振荡培养箱振荡消化。步骤3：过滤和离心：将消化后得到的混合液体经过滤网过滤掉不溶物质，将滤过的细胞悬液离心洗涤。步骤4：接种和培养：加入UltraCULTURE无血清培养液用以混合细胞，以1.0×105/cm2将过滤后的混合液体分别接种于细胞培养瓶中，用含胎牛血清的DF12培养液于37℃、3～8％CO2、饱和湿度的培养箱中培养。步骤5：传代：等到细胞贴壁后，每隔3～5d换液。待细胞生长至80～90％融合时，加入胰酶消化细胞，进行传代。步骤6：细胞冻存：收集细胞并计数和活率，按3×107/ml/管放入细胞冻存管，加入冷冻保护液，放入液氮罐中进行冷冻保存；步骤7：细胞复苏：将细胞冻存管从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中，不断摇动，2min中之内解冻，离心洗涤弃上清，获得间充质干细胞，按照需求使用即可。