[发明专利]一种提高油用牡丹籽含油率的转基因方法

摘要

一种提高油用牡丹籽含油率的转基因方法，属于生物工程领域，该方法首先构建多基因植物表达载体，然后通过根癌农杆菌将其转入到牡丹植株组织中表达并遗传，其中，所述多基因植物表达载体的构建是在pBI1211‑GUS上35S启动子的3’末端引入一个多克隆位点，构建载体pBI121‑35S MCS，再将外源基因WRI1、LEC2和FAD2依次插入到pBI121‑35S MCS中，构建形成多基因植物表达载体pBI121‑WRI1‑LEC2‑FAD2。该方法已构建的多基因植物表达载体为基础，使其能够在牡丹植株中有效表达，收获的牡丹籽能够稳定遗传且含油率高。

主权项

1.一种提高油用牡丹籽含油率的转基因方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：设计引物，分别扩增3’和5’端均带有酶切位点的WRI1和FAD2基因；在pBI1211载体上引入一个多克隆位点；通过多克隆位点将WRI1和FAD2基因插入到pBI1211载体上，构建多基因植物表达载体pBI121-WRI1 -FAD2；步骤二、制备感受态根癌农杆菌GV3101，将构建的多基因植物表达载体进行根癌农杆菌的转化，验证正确后获取阳性根癌农杆菌；无菌条件下将阳性根癌农杆菌培养至对数期，形成浸染液，备用；步骤三、取生长状况良好的牡丹新生幼嫩叶片，在无菌条件下消毒并置于1/2MS培养基上，20-22 ℃于暗处预培养2-3天，用浸染液浸染后在黑暗条件下共培养2-3天，然后转入到诱导培养基上进行愈伤组织的诱导；愈伤组织形成后，将愈伤组织从基部切下，转至MS培养基上培养，获取无根苗，再将无根苗转入生根培养基上培养，获取牡丹苗，驯化移栽于温室内，之后按照常规方法进行管理。