[发明专利]一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法

摘要

本发明公开了一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，通过对绵羊脂肪的清洗、消毒、清理、破碎、消化和离心分离等步骤，得到绵羊脂肪前体细胞，并储放在恒温培养箱中；本发明与常规分离技术相比，分离纯度高、不易污染、保留细胞原有的活力，而且分离费用低，分离后的最佳培养环境易于制造，保证分离后的细胞不分化，保证细胞体外增殖速度，促进了对干细胞研究的发展，适合推广使用。

主权项

1.一种绵羊脂肪前体细胞的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将绵羊清洗干净并牵至无菌室中，再使用酒精清洗2-3次，然后将绵羊颈部处死，取出腹股沟脂肪组织5-12g，放入酒精中浸泡10-20s，再放入无菌硫化铅溶液中；S2、取出脂肪组织并置入D-Hanks液中漂洗3-6次，去除结缔组织和血管，再清洗1-2次，置于无菌烧杯中；S3、将S2中处理后的脂肪组织切碎，体积不大于1mm3，切碎后加入到恒温培养基中，加入0.07-0.08%的I型胶原酶，并将恒温培养基置于37℃的恒温培养箱中，控制培养箱内二氧化碳的浓度的5%；S4、使S3中处理后的脂肪组织碎片消化1-2h，完全消化后加入相同体积的完全培养液，终止消化，再通筛网筛除杂质，得到消化后的液体；S5、将S4中获取的液体置于离心管中，设定转速为2000-2200rpm，时间为6-8min，去除上层漂浮的脂肪细胞和上清液，再用完全培养液清洗2-3次后悬重沉淀；S6、取4-8ml悬重液放到培养皿中，加入12-20ml的完全培养液，混合均匀并置于37℃的恒温培养箱中。