[发明专利]检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法

摘要

本发明检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法是使用液相色谱分析仪和紫外检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪和紫外检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待检测血液中的丙戊酸药物浓度，该方法提高了定量结果的准确性，极大地缩短分析时间，使检测过程简便快速，实验成本降低，更利于在临床治疗中对患者体内的丙戊酸血药浓度进行监测，为丙戊酸的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。

主权项

一种检测血液中丙戊酸药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液15μL和285μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1000‑2000rpm下涡旋混匀30s‑1min后，加入含有20‑40％体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL，其中高氯酸溶液的含水量为80‑95％，并在转速为1200‑2000rpm下涡旋混匀2‑4min后，再以10000‑15000rpm的转速下高速离心10‑20min，得到上清液，分别取上述上清液200uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的丙戊酸色谱图，以上述至少三个标准溶液的丙戊酸峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有丙戊酸的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；(a)标准工作液的配制：精确称取丙戊酸标准品45mg置于1ml容量瓶，用含水量为0％‑25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于1ml，得到标准储备液A，其丙戊酸的浓度为38658mg/L，将标准储备液A用含水量为10％‑40％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有100‑10000μg/mL丙戊酸的范围内配置出各标准工作液，并在‑80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于‑20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用移液枪移取步骤(二)的血清或血浆置于1.5ml的离心管中；(c)用移液枪移取含有20‑40％体积乙腈的高氯酸溶液的沉淀剂300μL加入步骤(b)的离心管中，其中高氯酸溶液的含水量为80‑95％，然后以1200‑2000rpm的转速下涡旋混合2‑4min后，再在10000‑15000rpm的转速下高速离心10‑20min，得到上清液即为待测样品；(四)待测样品的检测移取步骤(c)待测样品200uL，使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述待测的样品进行检测，得出上述待测样品的丙戊酸色谱图，将上述色谱图中的丙戊酸峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的丙戊酸药物浓度。