[发明专利]水稻成熟胚愈伤组织的诱导培养方法在审
| 申请号： | 201711498638.2 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108277233A | 公开（公告）日： | 2018-07-13 |
| 发明（设计）人： | 刘佳音;张国栋;葛旭娟;万吉丽;罗碧;米铁柱 | 申请（专利权）人： | 青岛袁策生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/00;A01H4/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京华仁联合知识产权代理有限公司 11588 | 代理人： | 李冰 |
| 地址： | 266000 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本申请公开了一种水稻成熟胚愈伤组织的诱导培养方法：1)选取饱满、无霉变成熟水稻种子，用手工脱去谷壳；2)在超净工作台上，加入无菌水进行清洗；3)弃水，倒入适量75％酒精，摇动搅拌，表面消毒1‑3min；4)弃酒精，加无菌水进行清洗；5)弃水，加入1～3％NaClO，摇动搅拌，震荡灭菌20‑30min；6)弃1～3％NaClO，用无菌水清洗4‑5次，每次停留1‑2分钟；7)倒去无菌水，用灭菌后的无菌滤纸将种子表面的水分吸干。本发明方法通过改变培养温度和培养时间，缩短农杆菌介导转化水稻的进程，并提高了水稻愈伤组织的诱导率和转化率。 | ||
| 搜索关键词： | 无菌水 水稻成熟胚 诱导培养 愈伤组织 灭菌 摇动 酒精 清洗 农杆菌介导转化 水稻愈伤组织 无菌水清洗 表面消毒 成熟水稻 无菌滤纸 种子表面 诱导率 谷壳 脱去 吸干 霉变 震荡 水稻 停留 申请 进程 | ||
【主权项】：
1.一种水稻成熟胚愈伤组织的诱导培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选取饱满、无霉变成熟水稻种子，用手工脱去谷壳；2)在超净工作台上，加入无菌水进行清洗；3)弃水，倒入适量75％酒精，摇动搅拌，表面消毒1‑3min；4)弃酒精，加无菌水进行清洗；5)弃水，加入1～3％NaClO，摇动搅拌，震荡灭菌20‑30min；6)弃1～3％NaClO，用无菌水清洗4‑5次，每次停留1‑2分钟；7)倒去无菌水，用灭菌后的无菌滤纸将种子表面的水分吸干；8)用镊子、解剖刀取出灭菌种子的成熟胚，将其接种于愈伤组织诱导培养基上，18～28℃暗培养7天；9)培养结束后，剥下成熟胚盾片长出的愈伤组织，转入继代培养基上，在相同条件下继代培养；以后每两周继代培养一次；挑选色泽淡黄、结构致密的愈伤组织继代培养6‑7d后，用于农杆菌转化受体。
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